Exploración de la interacción entre la región 5´UTR del Sugarcane Mosaic Virus (SCMV) y proteínas del hospedero maíz

Abstract

Resumen Antecedentes: El virus del mosaico de la caña de azúcar, SCMV (Potyviridae) es un miembro de la gran familia de virus de ARN de cadena positiva, sin una estructura CAP en su extremo 5´no traducido (5`UTR), pero con una proteína viral unida al genoma (VPg) y una cola poli A en su extremo 3´UTR. Se ha sugerido que proteínas del hospedero hacen un puente entre las regiones no traducidas virales 5´y 3´ para potenciar la traducción viral. Dado que las regiones no traducidas presentes en los genomas virales contienen elementos involucrados en la regulación de su ciclo replicativo, es importante analizar la interacción entre estas regiones y las proteínas virales o del hospedero para inferir su función. Objetivo: Determinar si existen proteínas del hospedero maíz que pudieran estar interactuando con la región 5´UTR de SCMV. Metodología: La región 5´UTR de SCMV se amplificó por PCR incluyendo la secuencia del promotor T7 en la secuencia del oligo 5´ UTR y se generaron sus transcritos marcados radiactivamente. Los transcritos marcados fueron entrecruzados con extractos proteicos de hojas de maíz sanas e infectadas. Resultados: Los resultados sugieren la presencia de una proteína putativa de interacción del hospedante maíz de aproximadamente 53kDa, con la región 5´UTR de SCMV. Conclusión: Los ensayos de entrecruzamiento, especificidad y estabilidad de los complejos ARN-proteína sugieren que en el hospedante maíz existe al menos una proteína que interactúa con la región 5´ UTR de SCMV.Palabras Clave: Complejo ARN-proteína, entrecruzamiento UV, fracción proteica, Potyvirus, VPg.Abstract Background: Sugarcane mosaic virus is a member of the great family of positive sense RNA viruses, without a CAP structure in its 5´UTR end, but with a viral protein attached to the genome (VPg) and a poli A tail in its 3´UTR end. It has been suggested that some host proteins make a bridge between the untranslated 5´and 3´ regions (UTRs) to enhance the canonical and/or non-canonical virus translation. Since the UTR regions present in the viral genomes have some elements involved in the regulation of their replicative cycle, it is important to analyze the interaction that may occur between these regions and the viral or host proteins to infer regarding its function. Objective: To identify proteins of the host maize that could be interacting with the 5´UTR region of SCMV. Methodology: 5´UTR region of SCMV was amplified by PCR including the sequence of the T7 promoter in the 5´oligo sequence. The transcripts were radioactively labeled. Labeled transcripts were crosslinked with proteins extracts from healthy and infected maize leaves. Results: The results suggest the presence of a 53 kDa putative protein interacting with the 5 ´UTR region of SCMV. Conclusion: Crosslinking essays, specificity and the stability of the RNA-protein complex suggest that in maize host there is at least one protein that interacts with the 5´UTR region of SCMV.Keywords: RNA-Protein complex, UV crosslinking, protein fraction, Potyvirus, VPg