Monoclonal Antibodies Requiring Coating Buffer With Low Ph for Efficient Antigen Capture in Sandwich Elisa: The Rarities or Practically Important Phenomena?

Abstract

This article reexamines some opinions concerning pH requirements for optimal immobilization of monoclonal antibodies (mAbs) by passive adsorption in antigen capture ELISA. It was discovered that substitution of "classical" sodium phosphate (pH 7.5) and carbonate (pH 9.5) coating solutions by acid (pH 2.8) buffers maximized antigen capture 4 out of 10 different tested anti-HBsAg mAbs, resulting in a 1.5-2.5 increase of binding curve coefficients. By measuring both mAbs amounts and functionality, the enhancement effect was attributed to the better preservation of solid phase antibodies activity.

Inhibition of astrocyte hemichannel improves recovery from spinal cord injury

“…Data were analyzed and plotted with Graph-Pad Prism software. EC 50 value was determined with best fit (61,62).…”

Changing Cross-Reactivity for Different Immunoassays Using the Same Antibodies: Theoretical Description and Experimental Confirmation

“…The concentration of the hapten-protein conjugate used for immobilization was 475 times higher than the concentration of the SA-(fluorescein derivative) conjugate in FPIA. Even taking into account the fact that, according to existing concepts, when immobilized on a plate, more than 90% of the protein may lose activity [56][57][58], it can be argued that the concentration of the modified hapten (Ag* in the proposed model) is several times higher for ELISA than for FPIA. This means that the ELISA is predicted to be more cross-reactive than FPIA is.…”

The enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA): history, theory and application

“…Однако в некоторых немногочисленных работах описаны поликлональные и моноклональные антитела, для сохранения антигенсвязывающей активности которых использовали буферные растворы с более низким или более высоким значением рН [6]. В нашей лаборатории в процессе конструирования сэндвич-метода определения HBsAg были получены и использованы МКА, адсорбция которых в буферных растворах с рН 2.8 позволяла значительно увеличить аналитическую чувствительность метода [7]. Обнаруженный феномен побудил нас провести более углубленное исследование, цель которого заключалась в получении ответов на несколько важных вопросов.…”

“…Обнаруженный феномен побудил нас провести более углубленное исследование, цель которого заключалась в получении ответов на несколько важных вопросов. Являются ли описанные в нашей работе [7] «кислотоустойчивые» МКА к HBsAg неким редким явлением или это отражение более общих свойств антител, важных с теоретической и практической точек зрения. И каковы механизмы повышения аналитической чувствительности ИФА при использовании адсорбционных буферов с «жестким» значением рН для иммобилизации подобного рода МКА.…”