Amaç: Gemifloksasin Mesilat dördüncü jenerasyon fluorokinolon antibakteriyel ajandır. Basit, doğru ve hassas bir ters fazlı (RP)-ultra performanslı sıvı kromatografisi (UPLC) yöntemi, Gemifloksasin Mesilatın, bulk ve farmasötik preparatında kısa sürede analizi için geliştirilmiş ve valide edilmiştir. Gereç ve Yöntemler: Optimum ayırma, Acclaim TM RSLC 120 C18, 2.2 μm (2.1×100 mm) kolonu kullanılarak, 30°C'de, 75:25 (h/h) asetonitril:fosfat tamponu (25 mM) içeren pH 3.0 izokratik hareketli faz ile 0.5±0.03 dk'da elde edildi. Kolon atığı 0.5 mL/dk'lık bir akış hızında fotodiyod detektörü kullanılarak 276 nm'de izlenmiştir. Yöntem Uluslararası Uyumlaştırma Konferansı kılavuzlarına göre valide edildi. Bulgular: Kalibrasyon eğrisinin doğrusallığı 0.5 μg/mL ile 10 μg/mL arasındadır ve regresyon katsayısının karesi (r 2) 0.9991'dir. Gün içi kesinliğin % bağıl standart sapması (RSD) %0.081 ile %1.233 arasında değişirken, günler arası için %0.364 ile %1.018 arasında değişiyordu. Yöntem %93.71 ile %100.29 ve % RSD değeri 1.054 ile 2.722 arasında değişen % geri kazanım ile doğrudur. Saptama limiti ve tayin limiti sırasıyla 0.066 ve 0.2 μg/mL idi. Sonuç: Valide edilmiş yöntem, Gemifloksasin Mesilatın bulk ve dozaj formundan tayininde kısa sürede (1 dakikadan az) tayinin olabileceğini kanıtlamıştır. Bildiğimiz kadarıyla, bu, Gemifloksasin Mesilatın belirlenmesi için ilk RP-UPLC yöntemidir. Anahtar kelimeler: Gemifloksasin Mesilat, ultra performanslı sıvı kromatografisi, metod validasyonu Objectives: Gemifloxacin Mesylate is a fourth generation fluoroquinolone antibacterial agent. A simple, accurate, and precise reversed phase (RP)ultra performance liquid chromatography (UPLC) method was developed and validated for short time analysis of Gemifloxacin Mesylate in its bulk and pharmaceutical preparation. Materials and Methods: The optimum separation was achieved at 0.5±0.03 min using an Acclaim TM RSLC 120 C18 column 2.2 μm (2.1×100 mm) at 30°C by isocratic mobile phase at pH 3.0 composed of acetonitrile:phosphate buffer (25 mM) in a ratio of 75:25 (v/v). The column effluents were monitored at 276 nm using a photodiode array detector at a flow rate of 0.5 mL/min. The method was validated according to International Conference on Harmonization guidelines. Results: The linearity of the calibration curve ranged from 0.5 μg/mL to 10 μg/mL and the square of the regression coefficient (r 2) was 0.9991. The % relative standard deviation (RSD) of inter-day precision ranged from 0.081% to 1.233%, while for intra-day it ranged from 0.364% to 1.018%. The method was accurate with % recovery ranging from 93.71% to 100.29% and % RSD ranging from 1.054 to 2.722. The limit of detection and the limit of quantification were 0.066 and 0.2 μg/mL, respectively. Conclusion: The validated method proved its ability for the assay of Gemifloxacin Mesylate in its bulk and dosage form in a short time (less than 1 min). To the best of our knowledge, this is the first RP-UPLC method for the determination of Gemifloxacin Mesylate.