Präparative Elektrophorese von Elastase. Einfluß von Metallionen auf das Enzym

Abstract

Proteolytische Enzyme werden in immer stärkerem Maße als Hilfsmittel bei der Strukturaufklärung von Eiweißstoffen herangezogen, da es nur mit ihrer Hilfe gelingt, größere Peptidbruchstücke von Proteinen zu erhalten. Um jedoch bestimmte Peptidbindungen möglichst selektiv spalten zu können, ist es wünschenswert, Enzyme frei von Fremdproteasen zu besitzen. Auch kann die Spezifität der Enzyme nur an reinen Präparaten wirklich eindeutig untersucht werden.Für die Darstellung reiner Enzyme hat sich bereits in mehreren Fällen die kontinuierliche Papierelektrophorese bewährt. Arginase 1 und Trypsin 2 wurden nach diesem Verfahren von Graßmann und Mitarbeitern in reiner Form erhalten. In der vorliegenden Arbeit wird die elektrophoretische Reinigung von Elastase beschrieben.Erstmals 1949 berichteten B an g a und Balo 8 über ein Enzym in Pankreas, welches Elastin zu verdauen vermag, wozu Trypsin und Chymotrypsin nicht in der Lage sind 4 . In weiteren Versuchen gelang ihnen eine etwa 25fache Anreicherung 5 » e , Hall und Czerkawski 7 konnten das Enzym an AJuminiumoxyd-Cy-Gel etwa 40fach anreichern. Eine wesentlich weitergehende Reinigung bis etwa 250fach erzielten Lewis, Williams und Brink 8 . Ihre besten kristallisierten Präparate mit einer spezif. Aktivität von 110 Elastaseeinheiten 6 /mg enthielten nach elektrophoretischen Untersuchungen 9 etwa 80% Elastase. Ein kleiner Anteil davon wurde in der Tiselius-Elektrophorese abgetrennt und besaß eine Aktivität von 130 E.E./mg 8 .* Pankreatopeptidase E (3.4.4.7); vgl.Mischung der aktiven Fraktion mit verschiedenen anderen abgetrennten Eiweißfraktionen ergab jedoch keine Aktivitätssteigerung (vgl. Tab. 3).