Produção de micélio de Crinipellis perniciosa em quatro meios de cultura, visando extração de DNA

Abstract

A produção de massa micelial é o primeiro passo para obter amostras de DNA de qualidade e quantidade suficiente para análises moleculares. Neste trabalho, objetivou-se analisar a quantidade e a qualidade do DNA de Crinipellis perniciosa extraído a partir de massa micelial obtida em quatro meios de cultura. Foi avaliado o peso de micélio liofilizado produzido nos seguintes meios de cultura: 1. extrato de levedura (2,5%); 2. extrato de malte (2,5%); 3. BD (batata 20% e dextrose 2%) e 4. extrato de malte + BD (50% de cada meio). O crescimento micelial foi iniciado a partir de um disco de micélio colocado no centro de placas de Petri de 90 mm contendo o meio testado e mantidas a 25 ºC e fotoperíodo de 12 h, por dez dias. Foi utilizado o DIC com dez repetições. O micélio produzido foi liofilizado e o DNA extraído utilizando-se o método do SDS com a desproteinização feita com ou sem fenol. A pureza do DNA baseada na relação A260/A280 e a integridade em gel de agarose 0,8% foram analisadas. A quantidade de micélio produzida nos meios de cultura 1 e 4 foi maior do que nos meios 2 e 3. O DNA extraído a partir de micélio produzido nos meios 2 e 3 apresentou maior integridade, obtendo-se produtos de amplificação mais nítidos. A desproteinização com fenol possibilitou a extração de DNA mais puro. Porém, DNA de ótima qualidade e em quantidade suficiente pode ser extraído a partir de micélio produzido em meios baratos como o BD, sem a necessidade da desproteinização com fenol.

Diversidade genética de isolados polispóricos de Crinipellis perniciosa (Stahel) Singer

“…Os dados relativos à variabilidade do patógeno podem ser importantes para a seleção de genótipos de plantas resistentes ou tolerantes em programas de melhoramento para obter resistência mais efetiva e durável para a doença vassoura-debruxa em Theobroma cacao (Van Der Plank, 1968;Andebrhan, 1986;Andebrhan & Furtek, 1999). Da mesma forma, Faleiro (2004) (Bastos & Evans, 1985, Bastos et al, 1988 Vários trabalhos relataram o uso de gel de eletroforese de proteínas totais (SDS-PAGE) para estudos de classificação de fungos (Clare et al, 1968;Höfling, J. F. et al, 2001;Park, C. S. et al, 2000;Jernejc, K. & Cimerman, A, 2001;Guarro, J. et al, 1999;Avio, L & Giovannetti, M., 1998;Silveira, S. F. & Alfenas, A. C., 2002).…”