Introducción: El agar Mueller Hinton es uno de los medios más utilizados en los laboratorios de microbiología para realizar la prueba de sensibilidad a los antimicrobianos, ya que tiene una buena reproducibilidad lote a lote, presenta bajos nivel de inhibidores que pueden afectar los resultados de sulfonamidas, trimetoprim y tetraciclinas, permitiendo el crecimiento de casi todas las bacterias no fastidiosas. El objetivo del control de calidad consiste en disminuir la variabilidad de los resultados obtenidos en las pruebas de sensibilidad, debido al efecto de las diferentes concentraciones de cationes divalentes Mg2+ y Ca2+, que pueden alterar la sensibilidad hacia aminoglucósidos y tetraciclinas. Y a La concentración de timina y timidina, en el medio, afecta la sensibilidad hacia sulfonamidas y de trimetoprim. El control de calidad se realiza lote a lote elaborado en los laboratorios de microbiología, utilizando cepas de referencia tipo ATCC, junto con diferentes sensidiscos. Objetivos: El objetivo de esta investigación fue mejorar las características técnicas del agar Mueller Hinton, el mismo que es universalmente recomendado para las pruebas de suceptibilidad antimicrobiana, frente a cepas ATCC Enterococcus faecalis 29212, Pseudomonas aeruginosa 27853 en el Hospital General de las Fuerzas Armadas del Ecuador y en el Hospital Pablo Arturo Suárez, implementando un proceso de capacitación sobre la preparación y control de los lotes del mencionado agar, ya que este medio requiere una preparación minuciosa, debido a que mínimas variaciones en su composición provocan alteraciones en los resultados de las pruebas anteriormente mencionadas. Metodología: Se realizó un estudio operativo no experimental pre y post evaluatorio con la finalidad de Implementar un proceso de capacitación en la preparación y control de lotes del agar Mueller Hinton para la mejora de las características técnicas y el desempeño del agar frente a cepas ATCC de control. Se realizó una evaluación de conocimiento previo y posterior a la capacitación. Resultados: Se estableció el grado de cumplimiento de condiciones de infraestructura, insumos y materiales para la elaboración del agar Mueller Hinton en los laboratorios de dos hospitales de la ciudad de Quito. Paralelamente, se evaluó el grado de conocimientos acerca de la realización del agar Mueller Hinton y el impacto de una intervención educativa sobre los mismos. El grado de cumplimiento de los requerimientos de infraestructura, insumos y materiales de cada casa de salud intervenida, fue de 64% (16/24) y 68% (17/24). El conocimiento sobre el tema, posterior a la capacitación mejoró en los participantes. Conclusiones: Al realizar un diagnóstico situacional de la infraestructura, insumos y materiales se determinó que la ausencia, el mal uso o desuso, constituyen los principales factores que afectaban la elaboración del medio; después que después de la capacitación se logró mejorar las características técnicas del medio para el control de calidad con las cepas ATCC Enterococcus faecalis ATCC 29212, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853. Por otro lado, observamos que a falta de actualización sobre los procesos en la elaboración del medio de cultivo, está relacionado con los posibles errores que afecten las características técnicas y su desempeño en las pruebas de sensibilidad antimicrobiana.