Red clover necrotic mosaic virus replication proteins accumulate at the endoplasmic reticulum

Abstract

Red clover necrotic mosaic virus (RCNMV) encodes N-terminally overlapping proteins of 27 and 88 kDa (p27 and p88) known to be required for replication. Green fluorescent protein (GFP) fusions were used to visualize the location of p27 and p88 within Nicotiana benthamiana cells. GFP:p27 fusions localized to the endoplasmic reticulum (ER), co-localized with ER-targeted yellow fluorescent protein and caused membrane restructuring and proliferation. Cellular fractionation of virus-inoculated N. benthamiana leaves confirmed the association of p27 with ER membranes. GFP:p88 fusions also localized to the ER and co-localized with GFP:p27. Both fusion proteins co-localize to the cortical and cytoplasmic ER and were associated with invaginations of the nuclear envelope. Independent accumulation in, and perturbation of, the ER suggests that p27 and p88 function together in the replication complex. This is the first report of a member of the Tombusviridae replicating in association with the ER.

Role of unfolded protein response in plant virus infection

“…Notably, these data are collected from three samples. In [12][13][14][15][16] Cerulenin is an inhibitor of de novo lipid synthesis. Protoplasts treated with cerulenin show reduced levels of CPMV, PVX and PCV replication indicating that formation of new membranes plays an essential role in the replication of these viruses.…”

“…[16][17][18] Real time RT-PCR analyses revealed an increase in ER resident chaperones which we initially hypothesized could due to expansion of the ER network or that increased levels of chaperones are needed in response to PVX infection. 15,16,19 Thus, (e.g., IRE1, PERK and ATF6). 1,6 BIP is known to be upregulated by bZIP60 and is also reported to regulate cytotoxic damage to cells.…”

Análisis Funcional De Proteínas Codificadas Por El Virus De La Rotura Del Color De La Flor Del Pelargonium

“…La información disponible actualmente acerca de las replicasas de los miembros de la familia Tombusviridae se ha obtenido fundamentalmente a partir de los trabajos realizados con varios miembros del género Tombusvirus [Bleve-Zacheo et al, 1997;Oster et al, 1998;Rubino et al, 2001;Weber-Lotfi et al, 2002;Panaviene et al, 2003;Navarro et al, 2004;Panavas et al, 2005a;] y con una especie del género Dianthovirus [Bates et al, 1995;Turner et al, 2004;Takeda et al, 2005;Okamoto et al, 2008;Mine et al, 2010b]. Estas investigaciones se han centrado en los requerimientos de secuencias y las actividades enzimáticas de la RdRp, en las propiedades de unión a ácidos nucleicos de ambas replicasas, su localización subcelular, la búsqueda de factores del huésped implicados en la replicación y en la interacción entre ambas proteínas.…”

“…En el género Dianthovirus se ha descrito que el producto de la ORF 1 (p27) del RCNMV, se asocia fuertemente al RE, induciendo restructuración y proliferación de las membranas de este orgánulo [Turner et al, 2004]. En lo que respecta al género Carmovirus, la determinación de las características citopatológicas de células infectadas unida a la predicción de una putativa MTS en la región N-t de las replicasas del virus del mosaico de la Galinsoga (Galinsoga mosaic virus, GaMV), del MNSV y del TCV, permitió proponer que el complejo replicativo de estos virus probablemente se asocia a mitocondrias [Ciuffreda et al, 1998].…”

“…En el género Tombusvirus, las proteínas p36 y p95 del CIRV co-localizan en mitocondrias [Weber-Lotfi et al, 2002;Pantaleo et al, 2004] y sus homólogas, las proteínas p33 y p92 del CymRSV [Lupo et al, 1994], del TBSV [McCartney et al, 2005] y del CNV [Panavas et al, 2005a], lo hacen en peroxisomas. Igualmente, en el género Dianthovirus se ha observado que ambas replicasas del RCNMV, p27 y p88, co-localizan en el RE [Turner et al, 2004]. Es previsible, además, que ambos tipos de proteínas interaccionen directamente durante el ciclo replicativo, una interacción que ha sido corroborada para al menos tres componentes de la familia Tombusviridae, el TBSV (Fig.…”