The Study of Diagnostic Potential of Monoclonal Antibodies Specific to the Membrane Protein of Cholera Agent in Enzyme-Linked Immunoassay

Abstract

МИКРОБИОЛОГИЯ 452017, issue 3 возбудитель холеры продолжает представлять угрозу для общественного здравоохранения, что диктует необходимость разработки новых мето-дов и средств диагностики. создание современных иммунодиагностических препаратов невозмож-но без высокоактивных специфических антител. уникальными преимуществами обладают моно-клональные антитела (мка) -они направлены к строго определенной антигенной детерминанте, имеют один изотип, обладают одинаковыми физико-химическими характеристиками и сродством к анти-гену, при наличии гибридом-продуцентов их можно получать по мере необходимости в неограниченном количестве. на сегодняшний день известно много за-рубежных и отечественных публикаций, касающих-ся получения моноклональных антител к различным поверхностным структурам холерного вибриона и его факторам патогенности. на основе мка скон-струированы высокоэффективные тест-системы: иммуноферментные [1,2,4,16, 20], иммунохрома-тографические [11, 17, 18] и иммуносенсорные [12]. нами на базе ростовского-на-дону противочумного института получен гибридный клон H2F6, продуци-рующий в культуральную среду мка, специфичные к мембранному белку OmpU и/или OmpT холерных вибрионов о1, о139 [5]. при оценке в иммунофер-ментном анализе диагностической значимости мка H2F6 на наборе штаммов холерных вибрионов о1/ о139 серогрупп, а также гетерологичных и близко-родственных микроорганизмов, установлено, что антитела взаимодействуют только с tcp + штаммами V. cholerae о1 и о139. по данным референс-центра Пробл. особо опасных инф. 2017; 3:45-48 цель -разработка пероксидазного конъюгата на основе мка H2F6 и изучение возможности его использова-ния для выявления tcp + штаммов холерных вибрионов о1/о139 серогрупп в прямых методах иФа. материалы и методы. в работе использовали гибридный клон H2F6, синтезирующий в культуральную среду моноклональные антитела, специфичные к белку наружной мембраны холерного вибриона. результаты и выводы. на основе мка сконструирован пероксидазный конъюгат, позволяющий выявлять tcp + штаммы V. cholerae о1 и о139 в пря-мом тиФа и дот-иФа. испытания препарата на наборе штаммов холерных вибрионов и гетерологичных микро-организмов показали его специфичность в отношении V. cholerae о1 и о139. моноклональный пероксидазный конъюгат H2F6 может быть использован для детекции в иммуноферментных методах эпидемически значимых штаммов холерных вибрионов о1/о139 серогрупп.Ключевые слова: холерный вибрион, моноклональные антитела, иммуноблоттинг, твердофазный иммунофер-ментный анализ, дот-иммуноанализ, пероксидазный конъюгат. The Study of Diagnostic Potential of Monoclonal Antibodies Specific to the Membrane Protein of Cholera Agent in Enzyme-Linked Immunoassay Rostov-on-Don Research Anti-Plague Institute, Rostov-on-Don, Russian FederationObjective of the study was to develop peroxidase conjugate on the base of monoclonal antibodies (MCA) H2F6 and to study the possibility of its application for the detection of tcp + Vibrio cholerae O1/O139 strains using direct ELISA methods. Materials and methods. Utilized for the inv...