OBJETIVO: Realizar uma revisão de literatura atualizada sobre hemocultura negativa associada à Endocardite Infecciosa (EI). MÉTODOS: Selecionou-se 72 artigos das bases de dados PubMed, SciELO e ScienceDirect, de 2018 a 2023, com os termos DeCS/MeSH: “bacterial endocarditis”, “endocardite bacteriana”, “negative blood culture” e “hemocultura negativa”, usando o Operador Booleano “AND/E” e, aplicados os critérios de inclusão/exclusão, considerou-se 18 artigos para este trabalho. RESULTADOS: Visando identificar patógenos que não são cultiváveis ou difíceis de cultivar, métodos alternativos devem ser abordados, sendo a Reação em Cadeia da Polimerase o mais bem sucedido. Ademais, a análise metagenômica baseada em sequenciamento de Nova Geração e o ecocardiograma podem ser utilizados. Dentre os artigos abordados, 7 deles citaram os patógenos comuns em caso de hemocultura negativa, sendo eles: Staphylococcus aureus, Streptococcus spp., HACEK, Enterococcus faecalis, Candida e Aspergillus. CONCLUSÃO: Fatores como a antibioticoterapia prévia e procedimentos inadequados na coleta podem estar associados à hemocultura negativa. Compreender as dificuldades encontradas, discutir novas metodologias e realizar estudos atualizados sobre a temática são de extrema importância para o diagnóstico assertivo da EI e para iniciar a conduta terapêutica o mais rápido possível.