A Multicommuted Flow Procedure for the Determination of Cholesterol in Animal Blood Serum by Chemiluminescence

Pires, Cherrine K.; Reis, Boaventura F.; Galhardo, Cristiane Xavier; Martelli, Patrícia Benedini

doi:10.1081/al-120026418

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“…As enzimas foram imobilizadas em esferas de vidro funcionalizadas com aminopropil 14,16 , usando parte das soluções dos "kits" comerciais Sigma "Diagnostics" 19 , Labtest Diagnóstica 20 e Labtest Diagnóstica 21 para as determinações de 3-hidroxibutirato, glicose e colesterol, respectivamente. Para comparação dos resultados foram utilizados os mesmos "kits" e as amostras foram processadas de acordo com as instruções do fabricante.…”

Section: Determinação De Colesterolunclassified

“…As enzimas glicose oxidase, colesterol esterase e colesterol oxidase foram imobilizadas separadamente em esferas de vidro, conforme descrito na literatura 15,16,23 . Uma massa de aproximadamente 0,1 g de esferas de vidro foi lavada com água e, posteriormente, com solução 0,2 mol L -1 de K 2 CO 3 (pH 10,5).…”

Section: Imobilização Da Glicose Oxidase Colesterol Esterase E Colesunclassified

“…Os procedimentos para determinação de glicose e colesterol foram baseados em detecção por quimiluminescência 15,16 , empregando-se módulo de análises baseado em multicomutação, mostrado no diagrama da Figura 2. Nesta configuração, as válvulas V 1 , V 2 , V 3 e V 4 estão desligadas, e a solução transportadora (C) está fluindo através da bobina de reação (B) e da coluna enzimática (Ce) em direção ao detector (DET).…”

Section: Determinação De Glicose E Colesterolunclassified

“…Em trabalhos anteriores 15,16 observou-se que a temperatura óti-ma para o desenvolvimento da reação para os dois analitos foi em torno de 25 o C, então, foi mantido este valor para a temperatura do laboratório.…”

Section: Glicose E Colesterolunclassified

“…Além disso, tem a vantagem de ser um sistema fechado, o que minimiza os riscos de contaminação da amostra e, também, proporciona maior segurança para o operador 10,11 . Os procedimentos mais eficientes para a determinação de 3-hidroxibutirato, glicose e colesterol em sangue de animal são baseados em reações enzimáticas em solução 12,13 ou imobilizadas em esferas de vidro [14][15][16] .…”

Section: Introductionunclassified

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Imobilização de enzimas a partir de "kit" comercial: determinação de parâmetros metabólicos em sangue animal empregando multicomutação em fluxo

Pires¹,

Reis²

2005

Quím. Nova

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Recebido em 23/3/04; aceito em 4/10/04; publicado na web em 2/2/05 ENZYME IMMOBILIZATION USING A COMMERCIAL KIT: DETERMINATION OF METABOLIC PARAMETERS IN ANIMAL BLOOD EMPLOYING A MULTICOMMUTATION FLOW SYSTEM. Automatic flow procedures based on the multicommutation concept, dedicated to the determination of 3-hydroxybutyrate, glucose and cholesterol are proposed. The enzymes were immobilized on glass beads and packed into mini-columns that were coupled to a flow system. Sampling throughputs of 55, 40 and 40 determinations per hour, linear response from 10 to 150, 50 to 600, 25 to 125 mg L -1 , detection limits of 1.5, 14 and 4 mg L -1 and relative standard deviations of 1, 2 and 2% for 3-hydroxybutyrate, glucose and cholesterol, respectively, were achieved.Keywords: enzymatic reactions; flow injection analysis; commercial kit. INTRODUÇÃOO estado nutricional dos animais tem forte influência na produtividade e pode ser avaliado a partir de alguns constituintes bioquímicos do sangue animal. Neste sentido, Payne e Payne 1 sugerem a elaboração de um perfil metabólico, o qual consiste na determinação dos teores de alguns constituintes bioquímicos encontrados no sangue dos animais. De acordo com Ekman 2 , através do perfil metabólico é possível investigar as possíveis relações entre alimentação, constituintes sanguíneos e performance do animal. Dentre as espécies bioquímicas necessárias para traçar o perfil metabólico do estado nutricional dos animais destacam-se 3-hidroxibutirato, glicose e colesterol 3-5 . O 3-hidroxibutirato é uma das principais fontes de energia para os animais, ajudando na digestão da celulose, além do fornecimento de energia para a movimentação do animal. Assim, o 3-hidroxibutirato é um importante parâmetro no estado de desnutrição do animal 6 . A glicose é um indicador plasmático de metabolismo energético e, em vista disso, sua determinação tem grande importância no acompanhamento do estado de saúde do animal 4 . A determinação de colesterol é requerida em diagnósticos clínicos como importante parâmetro na avaliação das funções hepáticas do animal 5 . Os métodos para a determinação de constituintes bioquímicos encontrados no sangue, geralmente, são baseados em "kits" disponíveis no mercado. Neste caso, as metodologias utilizadas são manuais, o que torna os procedimentos morosos e dispendiosos. Estas dificuldades podem ser minimizadas empregando procedimentos automáticos baseados no processo de análise química em fluxo (FIA) 7-9 . Procedimento analítico baseado no processo FIA permite processar grande número de amostras em pouco tempo, e reduzir o emprego de vidraria. Além disso, tem a vantagem de ser um sistema fechado, o que minimiza os riscos de contaminação da amostra e, também, proporciona maior segurança para o operador 10,11

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Section: Determinação De Colesterolunclassified

Section: Imobilização Da Glicose Oxidase Colesterol Esterase E Colesunclassified

Section: Determinação De Glicose E Colesterolunclassified

Section: Glicose E Colesterolunclassified

Section: Introductionunclassified

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Imobilização de enzimas a partir de "kit" comercial: determinação de parâmetros metabólicos em sangue animal empregando multicomutação em fluxo

Pires¹,

Reis²

2005

Quím. Nova

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The Concept of Multi‐Commutation in Flow Analysis

Feres

Zagatto

Santos

et al. 2008

Advances in Flow Analysis

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Hemin Functionalized Multiwalled Carbon Nanotubes as a Matrix for Sensitive Electrogenerated Chemiluminescence Cholesterol Biosensor

Yuan

Chen

et al. 2013

Electroanalysis

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Based on hemin‐MWCNTs nanocomposite and hemin‐catalyzed luminol‐H2O2 reaction, a sensitive electrogenerated chemiluminescence (ECL) cholesterol biosensor was proposed in this paper. Firstly, hemin‐MWCNTs was prepared via π–π stacking and modified on the surface of GCE. Subsequently, cholesterol oxidase (ChOx) was adsorbed on the modified electrode to achieve a cholesterol biosensor. Hemin‐MWCNTs nanocomposite provided the electrode with a large surface area to load ChOx, and endowed the nanostructured interface on the electrode surface to enhance the performance of biosensor. The biosensor responded to cholesterol in the linear range from 0.3 µM to 1.2 mM with a detection limit of 0.1 µM (S/N=3).

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A Multicommuted Flow Procedure for the Determination of Cholesterol in Animal Blood Serum by Chemiluminescence

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Imobilização de enzimas a partir de "kit" comercial: determinação de parâmetros metabólicos em sangue animal empregando multicomutação em fluxo

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The Concept of Multi‐Commutation in Flow Analysis

Hemin Functionalized Multiwalled Carbon Nanotubes as a Matrix for Sensitive Electrogenerated Chemiluminescence Cholesterol Biosensor

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