A new method for quantitative determination of polysaccharides in the yeast cell wall. Application to the cell wall defective mutants ofSaccharomyces cerevisiae

Dallies, Nathalie; François, Jean; Paquet, Véronique

doi:10.1002/(sici)1097-0061(1998100)14:14<1297::aid-yea310>3.0.co;2-l

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“…Accumulation of chitin in the cell wall is often concomitant with activation of the cell wall integrity pathway (CWIP) (Dallies et al, 1998;Bickle et al, 1998). This process is governed by protein kinase C and results in the upregulation of a cascade of MAP kinases and in turn in the activation of transcription factors regulating genes involved in the synthesis of the cell wall polymers (Lewin et al, 1990).…”

Section: Resultsmentioning

confidence: 99%

Defect in dolichol‐dependent glycosylation increases sensitivity of Saccharomyces cerevisiae towards anti‐fungal drugs

Juchimiuk

Pasikowska

Zatorska

et al. 2010

Yeast

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Two temperature-sensitive Saccharomyces cerevisiae mutants, sec59-1 and dpm1-6, impaired, respectively, in dolichol kinase (Sec59p) and dolichyl phosphate mannose (DolPMan) synthase (Dpm1p), have an aberrant cell wall structure and composition. We tested their sensitivity to four classes of antifungal drugs used in clinical practice: 5-fluorocytosine, amphotericin B, caspofungin and itraconasole. The strains were resistant to itraconazole and sensitive to the other drugs used. The minimal inhibitory concentration (MIC) of caspofungin and amphotericin B was two-fold lower for sec59-1 and dpm1-6 than for the respective wild-type strains. The sensitivity of both mutants could be brought back to the wild-type level by a multicopy suppressor of the thermosensitive phenotype, the RER2 gene, encoding cis-prenyltransferase involved in dolichol biosynthesis. Biochemical analysis revealed slight changes of the cell wall composition, different in the mutants as compared to the wild-type in response to the drugs. Our data strongly support a relationship between dolichol phosphate level, protein glycosylation and antifungal sensitivity.

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Section: Resultsmentioning

confidence: 99%

Defect in dolichol‐dependent glycosylation increases sensitivity of Saccharomyces cerevisiae towards anti‐fungal drugs

Juchimiuk

Pasikowska

Zatorska

et al. 2010

Yeast

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“…Como sugerido por McCLEARY [17] o método proposto por McCLEARY para análise de β− glucanos, tem sido aplicado pelo Sub-Comitê do Cereal Chemistry Division of the Royal Australian Chemical Institute , e atualmente é recomendado como método australiano [33]. DALIES et al [6] afirmam que a parede celular de fungos e leveduras, são compostas principalmente, de β−glucanos, que hidrolisados levariam à formação de glicose, e de mananas e quitina (Figura 2), que hidrolisados levariam a formação de outras hexoses, como manose, e N-acetilglicosamina. A composição da parede celular de Fusarium oxysporum foi analisada por SCHOFFELMEER et al [32], sendo encontrados principalmente, quitina, α− e β−glucanos, e a análise de açú-cares destes polissacarídeos mostrou não somente a presença de glicose e N-acetilglicosamina, mas também de manose, galactose e ácido urônico.…”

Section: -Resultados E Discussãounclassified

Determinação da concentração de beta-glucano em cogumelo Agaricus blazei Murill por método enzimático

Park¹,

Ikegaki²,

Alencar³

et al. 2003

Ciênc. Tecnol. Aliment.

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Ciênc. Tecnol. Aliment., Campinas, 23(3): 312-316, set. -dez. 2003Determinação da concentração de β-glucano em cogumelo Agaricus blazei Murill por método enzimático, Park et al. -INTRODUÇÃOA maioria dos cereais contém quantidades variáveis de β−(1→3) e β−(1→4)-D-glucanos. Esses polissacarídeos são comuns entre os cereais e ocorrem em grande quantidade no endosperma e na parede celular de cevada, trigo e aveia [2,11]. A importância metabólica do β−glucano na saúde e na nutrição humana foi recentemente revisada por KLOPFENSTEIN [15]. Alimentos à base de aveia, ricos em fibras solúveis em água têm sido descritos como produtos hipocolesterotêmicos em humanos e, tem despertado interesse crescente junto à comunidade médica [1,27]. O β−glucano (Figura 1) é encontrado em todos cereais, mas as concentrações são maiores em aveia e cevada, com valores na faixa de 2 a 6% [10]. Os cogumelos comestíveis também apresentam compostos que têm propriedades funcionais, em particular os homo e hetero-glucanos com ligações glicosídicas do tipo β(1→3) e β(1→6) [16]. No entanto, além das propriedades farmacológicas encontradas nos polissacarídeos de origem vegetal, os polissacarídeos de origem fúngica apresentam várias outras propriedades tais como atividades antitumoral, imunomodulatória, antiviral, antimicrobiana e antiparasitária [3,9,34]. Entre as atividades farmacológicas relacionadas a diversas espécies de cogumelos que contém (1→3) e (1→6)-β−Dglucano, está a atividade antitumoral [3,9,14,16,19,20,21]. De acordo com KAWAGISH et al. [13,14] a fração de polissacarídeo estraído de Agaricus blazei, que apresenta atividade antitumoral é composta de um complexo de β−(1→6)−D-glucano e proteínas.O objetivo deste trabalho foi avaliar a concentração de β−glucano em cogumelos Agaricus blazei Murill cultivados no Brasil e no Japão em duas condições distintas (estufa e campo) através de método descrito por PROSKY et al. [29] e modificado pela Foundation of Japanese Food Analysis Center [8], pela quantificação de glicose liberada após sucessivas hidrólises enzimática e química. -MATERIAL E MÉTODOS -AmostrasAs amostras de cogumelos foram cultivadas no Brasil e no Japão, e em duas condições distintas de acordo com a Tabela 1. O cogumelo foi cultivado em estufa a 25±0,2ºC e umidade relativa (U.R.) superior a 90%, por 6 dias, sobre composto orgânico produzido a partir de bagaço de canα−deaçúcar, farelo de arroz, esterco de gado e galinha, contidos em sacos plásticos de 60 quilos. Para a amostra cultivada no campo, a incubação foi feita em composto orgânico coberto com terra estéril, em valas, a temperatura ambiente, a temperatura de 25±2ºC e U.R. aproximada de 60%. RESUMOCogumelos comestíveis contêm importantes propriedades funcionais. Em particular, β−glucanos, homo-e hetero-glucanos com ligações glicosídicas β(1→3), β(1→4) e β(1→6), supostamente responsáveis por algumas propriedades benéficas à saúde humana, como atividade imunomodulatória, antioxidante, antiinflamatória e anticancerígena. Neste trabalho, a quantidade de β−glucano presente em c...

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“…by accumulation of chitin, is triggered (Dallies et al, 1998;Bickle et al, 1998). We therefore measured the activation of the MAP kinase cascade (PKC1-Slt2), a pathway that is essential in the maintenance of the cell wall integrity (Lewin et al, 1990).…”

Section: Dolichol Level Affects Cell Wall Assembly In Yeast Early Glymentioning

confidence: 99%

Dissecting the role of dolichol in cell wall assembly in the yeast mutants impaired in early glycosylation reactions

Orłowski

Machula

Janik

et al. 2007

Yeast

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Evidence is presented that temperature-sensitive Saccharomyces cerevisiae mutants, impaired in dolichol kinase (Sec59p) or dolichyl phosphate mannose synthase (Dpm1p) activity have an aberrant cell wall composition and ultrastructure. The mutants were oversensitive to Calcofluor white, an agent interacting with the cell wall chitin. In accordance with this, chemical analysis of the cell wall alkali-insoluble fraction indicated an increased amount of chitin and changes in the quantity of β1,6-and β1,3-glucan in sec59-1 and dpm1-6 mutants. In order to unravel the link between the formation of dolichyl phosphate and dolichyl phosphate mannose and the cell wall assembly, we screened a yeast genomic library for a multicopy suppressors of the thermosensitive phenotype. The RER2 and SRT1 genes, encoding cis-prenyltransferases, were isolated. In addition, the ROT1 gene, encoding protein involved in β1,6-glucan synthesis (Machi et al., 2004) and protein folding (Takeuchi et al., 2006) acted as a multicopy suppressor of the temperature-sensitive phenotype of the sec59-1 mutant. The cell wall of the mutants and of mutants bearing the multicopy suppressors was analysed for carbohydrate and mannoprotein content. We also examined the glycosylation status of the plasma membrane protein Gas1p, a β1,3-glucan elongase, and the degree of phosphorylation of the Mpk1/Slt2 protein, involved in the cell wall integrity pathway.

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A new method for quantitative determination of polysaccharides in the yeast cell wall. Application to the cell wall defective mutants ofSaccharomyces cerevisiae

Cited by 232 publications

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Defect in dolichol‐dependent glycosylation increases sensitivity of Saccharomyces cerevisiae towards anti‐fungal drugs

Defect in dolichol‐dependent glycosylation increases sensitivity of Saccharomyces cerevisiae towards anti‐fungal drugs

Determinação da concentração de beta-glucano em cogumelo Agaricus blazei Murill por método enzimático

Dissecting the role of dolichol in cell wall assembly in the yeast mutants impaired in early glycosylation reactions

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