Adaptation of Antibiotic Assay Methods for Routine Use

Falk, Carolyn R.

doi:10.2105/ajph.43.4.419

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“…In this way, turbidity provided by microbial growth is inversely proportional to the antibiotic concentration (Kavanagh, 1972). The test microorganism should be sensitive to the antibiotic tested and should grow in liquid culture medium in differently depending on the concentration of antibiotic (Cooper, 1963;Falk, 1953;Loy, Wright, 1959).…”

Section: Determination Of Experimental Conditionsmentioning

confidence: 99%

Antibiotic microbial assay using kinetic-reading microplate system

Lourenço

Pinto

2011

Braz. J. Pharm. Sci.

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The aim of this study was to determine the optimal experimental conditions to develop a methodology for microbiological assay of apramycin employing microplate and kinetic reading mode, and to validate the developed method, through evaluation of parameters of selectivity, linearity, linear range, limits of detection and quantification, accuracy and precision. The turbidimetric assay principle is simple: the test solution is added to a suspension of test microorganism in culture media, the mixture is incubated under appropriate conditions and the microbial growth is measured by photometric reading. Microplate with kinetic reading mode employed in antibiotic assay is of considerable interest since it allows reduction of material and analysis time and enables a large number of samples to be analyzed simultaneously, with automated reading and calculating. Established conditions considered the standard-curve of apramycin at concentrations from 5.0 to 35.0 mg mL -1 , and tryptic soy broth inoculated with 5% Escherichia coli (ATCC 8739) suspension. Satisfactory results were obtained with 2 hours of incubation. The developed method showed appropriate selectivity, linearity in the range from 5.0 to 35.0 mg mL , respectively, as well as satisfactory accuracy (recuperation = 98.5%) and precision (RSD = 6.0%). Microplate assay combined the characteristics of microbiological (evaluation of antibiotic activity against sensitive test microorganism) and physico-chemical (operationally straightforward and faster results) assays.Uniterms: Antibiotics/microbial assay. Apramycin/microbial assay. Apramycin sulfate. Turbidimetric assay/medicines analysis.O objetivo deste trabalho é determinar as condições experimentais ideais para o desenvolvimento de metodologia para a dosagem microbiológica de apramicina empregando microplacas e modo de leitura cinético e validar o método desenvolvido, através da avaliação dos parâmetros de especificidade e seletividade, linearidade, faixa ou intervalo linear, limite de detecção e quantificação, exatidão e precisão. O ensaio turbidimétrico é simples: a solução-teste é adicionada à suspensão de microrganismo-teste em meio de cultura, a mistura é incubada em condições apropriadas e o crescimento microbiano é medido por meio de leitura fotométrica. O emprego de método de microplacas com leitura cínética para a dosagem de antibióticos é de interesse considerável, uma vez que possibilita reduzir quantidade de material e tempo de análise necessários e permite o ensaio de grande número de amostras simultaneamente, com leitura e cálculo automatizados. As condições estabelecidas abrangem curva-padrão de apramicina com concentrações entre 5 e 35 mg/mL, e emprego de meio de cultura caldo de triptona-soja inoculado com Escherichia coli (ATCC 8739) na proporção de 5%. Foram obtidos resultados satisfatórios após 2 horas de incubação. O método desenvolvido apresentou especificidade e seletividade adequadas, linearidade na faixa de 5 a 35 mg/mL, limite de detecção e quantificação de 0,1 e 0,4 mg/mL, respectivament...

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Section: Determination Of Experimental Conditionsmentioning

confidence: 99%

Antibiotic microbial assay using kinetic-reading microplate system

Lourenço

Pinto

2011

Braz. J. Pharm. Sci.

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“…FALK 60 , em 1953, descreveu procedimentos para laboratório da rede oficial de saúde, objetivando colaborar no diagnóstico de doenças infecciosas e no estudo da terapia adequada, com vários antibióticos rotineiramente utilizados em setores da saúde pública. O ensaio de escolha foi o método de diluição em tubos, por permitir resultados mais exatos e com distinção entre níveis bacteriostático e bactericida.…”

Section: Diferentes Meios De Cultura Líquido Foram Testados Com Estreunclassified

Doseamento microbiológico de gentamicina por difusão em agar - proposta de delineamento experimental

Lourenço¹

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“…Recomenda-se controle dos meios de cultura, avaliação quanto à condição de esterilidade de cada lote, à capacidade de crescimento dos microrganismos-teste nos mesmos e conhecimento de sua sensibilidade frente ao antibiótico em questão (FALK, 1953).…”

Section: Revisão De Literaturaunclassified

“…(KAVANAGH, 1972). O microrganismo-teste deve ser sensível ao antibiótico avaliado e deve crescer no meio de cultura líquido de forma diferenciada em função da concentração do antibiótico (COOPER, 1963;FALK, 1953e LOY & WRIGHT, 1959.…”

Section: Validação Do Método Analíticounclassified

Doseamento microbiológico de apramicina - desenvolvimento e validação de método empregando leitura cinética em microplacas

Lourenço¹

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1. INTRODUÇÃO 2. REVISÃO DE LITERATURA 2.1. Dosagem microbiológica em tubos 2.1.1. Método de diluição seriada 2.1.2. Método turbidimétrico 2.1.3. Princípios do método turbidimétrico 2.1.4. Fatores de influência 2.1.4.1. Microrganismo-teste 2.1.4.2. Meio de cultura 2.1.4.3. Condições de Incubação 2.1.5. Curva dose-resposta 2.2. Ensaios empregando microplacas 2.2.1. Ensaios de antibióticos empregando microplacas 2.3. Validação de métodos analíticos 2.3.1. Planejamento e documentação da validação 2.3.1. Parâmetros de validação 2.3.1.1. Especificidade e seletividade

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Adaptation of Antibiotic Assay Methods for Routine Use

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Antibiotic microbial assay using kinetic-reading microplate system

Antibiotic microbial assay using kinetic-reading microplate system

Doseamento microbiológico de gentamicina por difusão em agar - proposta de delineamento experimental

Doseamento microbiológico de apramicina - desenvolvimento e validação de método empregando leitura cinética em microplacas

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