Monogamy is rare in fishes and is usually associated with elaborate parental care. When parental care is present in fishes, it is usually the male that is responsible, and it is believed that there is a relationship between the high energetic investment and the certainty of paternity (except in the case of sneaker males). Osteoglossum bicirrhosum is considered a monogamous fish, and has particular behavioral traits that permit the study of mating systems and parental care, such as male mouthbrooding. We investigated the genetic relationships of males with the broods found in their oral cavities in Osteoglossum samples collected in a natural environment in the lower Purus river basin, Amazonas, Brazil. Fourteen broods were analyzed for parentage (268 young and 14 adult males) using eight microsatellite loci. The results indicate that eleven broods show a monogamous system. In one brood, however, approximately 50% of the young were genetically compatible with being offspring of another male, and in another two broods, none of the subsampled young were compatible with the genotypes of the brooding male. The result of this first brood may be explained by the extra-parental contribution of a sneaker male, whereas cooperative parental care may explain the result in the other two broods.Monogamia é rara em peixes e está geralmente associada a cuidado parental elaborado. Quando cuidado parental está presente em peixes, usualmente o macho é responsável, e acredita-se que exista uma relação entre investimento energético elevado e a certeza da paternidade (exceto no caso de machos oportunistas). Osteoglossum bicirrhosum é considerado monogâmico e possui determinadas características comportamentais que permitem o estudo de sistemas de acasalamento e cuidado parental, como incubação bucal dos ovos e filhotes pelos machos. Quatorze ninhadas (268 filhotes e 14 machos adultos) foram coletadas em ambiente natural na bacia do baixo rio Purus, Amazonas, Brasil e analisadas para parentesco utilizando oito loci de microssatélites. Os resultados sugeriram, para onze ninhadas, um sistema de acasalamento monogâmico. Em uma ninhada, no entanto, cerca de 50% dos jovens eram geneticamente compatíveis como sendo descendentes de outro macho, e em outras duas ninhadas nenhum dos filhotes amostrados eram filhos dos machos que estavam realizando o cuidado. O resultado da primeira ninhada pode ser explicado pela contribuição extra-par de um macho oportunista, enquanto que o cuidado parental cooperativo pode explicar os resultados nas outras duas ninhadas.