Aminoacyl‐tRNA binding sites in <i>E. coli</i> and reticulocyte ribosomes

Busiello, Enzo; Girolamo, M. Di

doi:10.1016/0014-5793(73)80318-7

Cited by 6 publications

(2 citation statements)

References 20 publications

Supporting

Mentioning

Contrasting

Unclassified

Order By: Relevance

“…The operationally distinguished A and P sites are further defined as two physical binding sites on the ribosome, one of which binds aminoacyl-tR.NA (or puromycin) while the other binds peptidyl-tRNA, prior to peptidyl transfer (the sites may or may not reverse these role in successive rounds of transfer). There is some evidence that postulated additional binding sites for aminoacyl-tRNA do not occur (see [37] and references therein).…”

Section: Discussionmentioning

confidence: 99%

Affinity Labelling of 23‐S Ribosomal RNA in the Active Centre of Escherichia coli Peptidyl Transferase

Greenwell¹,

Harris²,

Symons³

1974

European Journal of Biochemistry

View full text Add to dashboard Cite

The radioactively labelled puromycin analogue, 5'-O-(N-br0moacetyl-p-aminophenyl-[~~P]-phosphoryl)3'-N-~-phenylalanyl puromycin aminonucleoside, has been used as an affinity label to identify components of Escherichia coli ribosomes that are in the active centre for the peptidyl transferase function of the ribosome.The affinity label as an acceptor substrate at 0 "C in the "fragment reaction" assay of peptidyl transferase was only about 10 % as efficient as puromycin, although both compounds had the same K, (approximately 0.1 mM). Preincubation of 70-S ribosomes with the affinity label at 27 "C led to irreversible inactivation of the peptidyl transferase activity (pH optimum 8.8) and extensive covalent attachment of radioactivity to the ribosomes (up to 25 molecules of affinity label per ribosome). All the inactivation of the enzyme, but only a small proportion of the covalent labelling (up to 2 molecules per ribosome), could be prevented by the presence of chloramphenicol, an A'-site-specific inhibitor of peptidyl transferase. The chloramphenicol-insensitive affinity labelling, designated nonspecific, was shown to be distributed over many ribosomal proteins in both the 50-S and 30-S ribo- The above results are consistent with a two-site model for the ribosome, if affinity labelling of the peptidyl transferase acceptor (A') and donor (P') sites follows a hypothetical mechanism in which the affinity label binds to (and subsequently reacts with) first the A' site, and then the P' site, in an ordered and strongly positive cooperative manner. The hypothesis explains the linear 2 : 1 correlation between specific affinity labelling and loss of peptidyl transferase activity, and also the small proportion of ribosome-affinity label complexes able to effect peptidyl transfer. The latter is considered to be the population of ribosomes labelled only in the A' site, because P' site labelling lags slightly behind that of the A' site. The results also suggest that 23-S ribosomal RNA has a direct functional role in the binding of the 3'-CCA terminal triplets of tRNA to peptidyl transferase. Definitions. AZ6,, unit, the quantity of material contained in 1 ml of a solution which has an absorbance of 1 at 260 nm, when measured in a I-cm pathlength cell; A' site of peptidyl transferase, that part of the ribosomal acceptor or A site which is in the active centre of peptidyl transferase; P'site of peptidyl Enzymes (CBN Recommendations 1972). Pancreatic transferase, that part of the ribosomal donor or peptidyl P site which is in the active centre of peptidyl transferase [6].Eur. J. Biochem. 49 (1974)

show abstract

Section: Discussionmentioning

confidence: 99%

Affinity Labelling of 23‐S Ribosomal RNA in the Active Centre of Escherichia coli Peptidyl Transferase

Greenwell¹,

Harris²,

Symons³

1974

European Journal of Biochemistry

View full text Add to dashboard Cite

show abstract

“…Επίσης σε σύστημα ελεύθερο κυττάρων από E. coli και από δικτυοερυθροκύτταρα κουνελιού η σπαρσομυκίνη αναστέλλει πλήρως την αντίδραση της πουρομυκίνης με το AcPhe-tRNA. Όταν όμως ως υπόστρωμα χρησιμοποιείται το Phe-tRNA, η αντίδραση αναστέλλεται σε πολύ χαμηλό βαθμό (Busiello and Di Girolamo 1973). Μόνο μετά το σχηματισμό του πρώτου πεπτιδικού δεσμού και τη μετατόπιση του σχηματισθέντος διπεπτίδυλο-tRNA στην Ρ-θέση του ριβοσώματος η σπαρσομυκίνη μπορεί και αναστέλλει το σχηματισμό των πεπτιδικών δεσμών.…”

Section: σπαρσομυκίνηunclassified

Μελετες Επι Της Πεπτιδυλοτρανσφερασης Σε Συστημα Απο Δικτυοερυθροκυτταρα Κουνελιου

Ιωαννου¹

View full text Add to dashboard Cite

Η παρούσα διατριβή εκπονήθηκε στο Εργαστήριο Βιολογικής Χημείας του Τμήματος Ιατρικής του Πανεπιστημίου Πατρών. Το θέμα της διατριβής ορίσθηκε από τον αείμνηστο Καθηγητή κ. Χ. Κουτσογεωργόπουλο, ο οποίος καθόρισε και παρακολούθησε επισταμένως την όλη πορεία της ερευνάς μου και συνέβαλε διεξοδικά στην τελική διαμόρφωση του κειμένου. Εκφράζω τις θερμές μου ευχαριστίες σε όλους όσους βοήθησαν στην εκπόνηση της διατριβής μου και ιδιαίτερα στα μέλη της Συμβουλευτικής και Εξεταστικής Επιτροπής. Επίσης ευχαριστώ τους κ.κ. Κ. Δημητρόπουλο και Δ. Μπάλλα για την πληκτρολόγηση και επεξεργασία του κειμένου με Η/Υ, τον κ. Α. Μπάκα για την πιστή απόδοση και παρουσίαση των σχημάτων, καθώς και τους κ.κ. Ι. Πικραμένο και Σπ. Αγοργιανίτη για την ηλεκτρονική επεξεργασία (μέσω scanner) των εικόνων.

show abstract

The Genetic Mechanism: II The Cell’s Employment of DNA

Dillon

1978

The Genetic Mechanism and the Origin of Life

View full text Add to dashboard Cite

Aminoacyl‐tRNA binding sites in E. coli and reticulocyte ribosomes

Cited by 6 publications

References 20 publications

Affinity Labelling of 23‐S Ribosomal RNA in the Active Centre of Escherichia coli Peptidyl Transferase

Affinity Labelling of 23‐S Ribosomal RNA in the Active Centre of Escherichia coli Peptidyl Transferase

Μελετες Επι Της Πεπτιδυλοτρανσφερασης Σε Συστημα Απο Δικτυοερυθροκυτταρα Κουνελιου

The Genetic Mechanism: II The Cell’s Employment of DNA

Contact Info

Product

Resources

About