In vitro cultivation is a very important method for the conservation of germplasm and the multiplication of endangered plants; however, studies on the adequacy of the nutrients used for a good development of each species are needed. The objective of this study was to evaluate the in vitro development of Laelia marginata Lindl. in culture media containing different nitrate/ ammonium ratios. Seedlings were obtained from seeds germinated in vitro. The treatments consisted of different nitrate/ ammonium ratios, with five proportions of NO 3 -and NH 4 + : T1-0/100; T2-25/75; T3-50/50; T4-75/25 and T5-100/0. At 200 days after seedling transplanting, height of the aerial part, root length, number of leaves, number of shoots, leaf length, leaf width, aerial and root dry mass and contents of chlorophyll a, b and carotenoids were evaluated. A completely randomized design was used, with five treatments and ten replicates. The combination of 50/50 nitrate/ammonium resulted in the highest values of aerial part and root length, dry mass of the aerial part and root, as well as leaf length and width. The proportion of 50/50 nitrate/ammonium resulted in the best initial development of L. marginata seedlings. Keywords: nitrogen sources, micropropagation, Orchidaceae RESUMO Desenvolvimento in vitro da orquídea ameaça de extinção Laelia marginata Lindl. em meios de cultivo contendo diferentes relações nitrato/amônio. O cultivo in vitro é um método de exímia importância na conservação de germoplasma e na multiplicação de plantas ameaçadas de extinção, porém necessita de estudos sobre a adequação dos nutrientes utilizados para um bom desenvolvimento de cada espécie. O objetivo foi avaliar o desenvolvimento in vitro de Laelia marginata Lindl. em meios de cultura contendo diferentes relações nitrato/amônio. As plântulas foram obtidas a partir de sementes germinadas in vitro. Os tratamentos consistiram em diferentes relações nitrato/amônio, sendo cinco proporções NO 3 -e NH 4 + : T1-0/100; T2-25/75; T3-50/50; T4-75/25 e T5-100/0. Aos 200 dias após o transplante das plântulas, foram avaliados altura da parte aérea, comprimento de raiz, número de folhas, número de brotos, comprimento da folha, largura da folha, massa seca da parte aérea e de raiz, teor de clorofila a, b e carotenoides. Utilizou-se delineamento inteiramente casualizado, sendo cinco tratamentos e dez repetições. A combinação de 50/50 nitrato/amônio resultou nos maiores valores de comprimento de parte aérea e raiz, massa seca de parte aérea e raiz, bem como comprimento e largura da folha. A proporção de 50/50 de nitrato/amônio resultou no melhor desenvolvimento inicial das plântulas de L. marginata. Palavras-chave: fontes de nitrogênio, micropropagação, Orchidaceae.