Análise interactômica da VDAC (voltage-dependent anion selective channel) nos cérebros aviar, bovino e murino

Abstract

A VDAC é a proteína mais abundante na membrana mitocondrial externa. Exerce o controle da atividade desta organela através da regulação da troca de metabólitos e tem função crucial no mecanismo de apoptose. Em nosso caso, os estudos dos complexos protéicos, das interações entre a VDAC e outras proteínas presentes no interior do neurônio que auxiliam na manutenção das funções das organelas e da célula, fazem parte da chamada interactômica. O presente estudo determinou o interactoma do complexo protéico Hexoquinase-VDAC-ANT presente em cérebros murino, bovino e aviar. Nosso objetivo foi identificar se as expressões diferenciadas da VDAC1 e VDAC2 verificadas nos cérebros murino, aviar e bovino, estão associadas a diferenças nos interactomas dessas proteínas. Este estudo revelou que as espécies aviar e bovina apresentaram o maior número de complexos protéicos contendo VDACs (5) quando comparadas com os neurônios de rato (1), o que é indicativo de uma cinética diferencial de montagem ou desmontagem do complexo. Além disso, a VDAC mitocondrial neuronal aviar também interage com mais proteínas em relação à VDAC mitocondrial neuronal bovina, o que é resultado de uma composição de subunidades diferenciada. Tais resultados indicam diferenças significativas quanto ao metabolismo energético e apoptótico no cérebro aviar, bovino e murino, existindo interações diferenciais da VDAC no cérebro aviar.

Isolamento e cultivo de neurônios e neuroesferas de córtex cerebral aviar

“…O estudo da VDAC proteína mais abundante da membrana mitocondrial externa e chave no transporte de metabólitos e morte celular, demonstrou um padrão de complexação proteico diferenciado (Crepaldi et al 2011), ou seja um interactoma proteico peculiar na espécie aviar em relação às espé-cies bovina e murina (Crepaldi et al 2013), bem como uma proporção diferenciada de isoformas da VDAC1 e VDAC2 em relação as outras espécies (Poleti et al 2010), além da presença de alterações pós-traducionais, destacando-se a fosforilação, em suas isoformas nesta espécie (Vitale et al 2012).…”

Purificação e caracterização da VDAC de mitocôndrias corticais aviares: identificação de modificações pós-traducionais nas porinas neuronais murinas e aviares

“…Desta maneira, a obtenção de dados relativos às modiϐicações pós-traducionais, principalmente os relativos à fosforilação tornam-se importantes no melhor entendimento das interações da VDAC com outras proteínas, especialmente a hexoquinase (Pastorino et al 2005, Crepaldi et al 2011.…”

“…O isolamento mitocondrial foi realizado conforme descrito por Crepaldi et al (2011), seguindo o mesmo procedimento, tanto para o material de procedência murina, quanto para o de procedência aviar. As proteínas totais foram determinadas pelo kit BCA Protein Assay Kit (código 23225, Thermo Scientiϐic) utilizando como padrão uma solução de albumina bovina.…”

“…A VDAC2 foi separada em três, cinco, e dois spots em células neuronais de murino, bovino e aviar, respectivamente (Poleti et al 2010). Outro aspecto diferencial entre neurônios aviar e murino, reside no fato de que nos primeiros a VDAC faz parte de mais complexos proteicos (5), que nos últimos (1) indicando uma cinética diferenciada de montagem (Crepaldi et al 2011).…”