Análisis inmunofenotípico de muestras normales de médula ósea: aplicaciones en el control de calidad en los laboratorios de citometría

Abstract

<p><strong></strong><strong>Objective.</strong> To describe a standardized flow cytometry protocol for the relative and absolute quantification of hematopoietic cell subpopulations from normal bone marrow, and to evaluate the expression of different lineage-specific cell markers with a reactivity associated to cell differentiation to be used as part of the routine quality control in cytometry laboratories. <strong>Materials and methods. </strong>The immunophenotypical analysis of different cell subpopulations was done with samples from normal bone marrow using a panel of monoclonal and polyclonal antibodies useful in the characterization of acute leukemias with four different fluorescences, by means of a protocol that combines cell labeling of membrane and cytoplasm antigens. Expression analysis was done in terms of mean fluorescence intensity (MFI). Fluorescent beads at a known concentration were added for calculating the absolute count of cells. <strong>Results.</strong> The antibody panel used allowed the identification and quantification of different normal leukocyte subpopulations of lymphatic and myeloid origin, including CD34+ stem cells and more differentiated cell populations in the granulocytic, monocytic, and erythroid cell lines. We established reference values for cell populations and cell marker expression ranges as part of routine quality control of cytometry laboratories. <strong>Conclusion.</strong> Immunophenotypic patterns identified as well as absolute and relative reference values for the different normal leukocyte populations from bone marrow can be used by cytometry laboratories as a basis for establishing reference parameters in phenotypic analyses of hematologic neoplasia.<strong> </strong></p> <p><strong>Key words: </strong>multiparametric flow cytometry, immunophenotype, hematologic neoplasia, normal bone marrow, reference values, quality control.</p>

Correlación de la t(9;22), t(12;21) e hiperdiploidia de ADN, con el inmunofenotipo, y la tasa proliferativa de células B neoplásicas de pacientes pediátricos con leucemia linfoide aguda de precursores B

“…Para la marcación inmunofenotípica se siguió un protocolo estandarizado que permite la detección de antígenos celulares localizados en la membrana, en el citoplasma o en ambos (9,11,12). Para la marcación de los antígenos de membrana, se incubaron 50 µl de muestra de médula ósea con los anticuerpos conjugados con fluorocromos durante 15 minutos a temperatura ambiente y en la oscuridad.…”

“…Como control de autofluorescencia (control negativo), se procesaron dos tubos adicionales sometidos a los mismos tratamientos descritos para las diferentes marcaciones, excepto que a estos no se les adicionó anticuerpo conjugado (12).…”

Determinação de valores de referência de células hematopoiéticas em medula óssea normal por citometria de fluxo: análise em 10 cores

“…A medula óssea (MO) é o tecido responsável pela produção, desenvolvimento e diferenciação de diversas linhagens celulares, através de um processo conhecido como hematopoiese. (1)(2)(3)(4)(5)(6) Indivíduos saudáveis apresentam células precursoras suficientes para garantir a produção contínua das linhagens celulares ao longo de sua vida. (1,(5)(6)(7) Durante o processo normal da hematopoiese, a presença de algumas anormalidades genéticas pode resultar em alterações clonais que podem impactar a produção e a diferenciação de células hematopoiéticas.…”

“…(1,(5)(6)(7) Durante o processo normal da hematopoiese, a presença de algumas anormalidades genéticas pode resultar em alterações clonais que podem impactar a produção e a diferenciação de células hematopoiéticas. (1,3,4,6,8,9) Essas alterações podem levar ao desenvolvimento de neoplasias hematopoiéticas, tais como leucemias, linfomas, tumores, neoplasias mieloproliferativas e outras doenças hematológicas malignas. (1,3,5,6,(8)(9)(10)(11)(12)(13)(14) As anormalidades mais frequentes ocorrem nas células hematopoiéticas e estão associadas a desvios na expressão antigênica, quando comparadas com células normais.…”

“…(1,3,5,6,(8)(9)(10)(11)(12)(13)(14) As anormalidades mais frequentes ocorrem nas células hematopoiéticas e estão associadas a desvios na expressão antigênica, quando comparadas com células normais. (1,4,6,8,15) Dentre esses desvios é comum observar nas células hematopoiéticas a ausência de expressão de antígenos associados aos estágios maturacionais, a presença de expressões anormais de acordo com a linhagem, a diminuição de expressão, o aumento da expressão e/ou a expressão de marcadores associados a outras linhagens (linhagem mista). (1,5,6,10,15) Consequentemente, esses desvios podem demonstrar desde uma parada maturativa durante a diferenciação celular, regeneração de MO após terapia imunossupressora, transplantes e presença de displasia de uma ou mais linhagens.…”