A banana (Musa spp.) é alvo de diferentes fitopatógenos, como Colletotrichum musae. Para o controle desse patógeno são usados fungicidas sintéticos, que podem causar desequilíbrios ambientais e microrganismos resistentes. Por isso, o uso de óleos essenciais (OE) têm sido uma boa alternativa ao uso de produtos agrícolas convencionais. O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade antifúngica do óleo essencial de Melaleuca alternifolia sobre C. musae. A caracterização química do OE foi realizada por CG-DIC e CG-EM. Para o teste in vitro, preparou-se uma solução estoque contendo OE, SPAN 85 e água, além dos controles negativo e positivo. Foram aplicados 5 tratamentos a base de OE, cujas concentrações variaram de 1,5 a 5,5 μL/mL. Os principais compostos identificados foram terpinen-4-ol, γ-Terpinene e α-Terpineno. A partir da concentração de 4,5 µL/mL, o fungo foi 100% inibido. A CI50 foi estimada em 2,63 µL/mL. Resultados como esse mostram o potencial promissor do uso do óleo essencial de M. alternifólia para o controle de C. musae,