Aplicação da técnica de REP - PCR no rastreamento de Staphylococcus aureus em sala de ordenha, para o monitoramento da qualidade do leite

Abstract

A identificação e classificação bacteriana são de suma importância no ambiente, na indústria, na medicina veterinária, na microbiologia e na ecologia microbiana. Um número de diferentes métodos genotípicos e fenotípicos estão sendo empregados para identificação e classificação microbiana. A técnica de REP-PCR é baseada no uso de primers sintetizados a partir de sequências repetidas de DNA, chamadas de palindrômicas extragênicas repetidas (REP), e têm sido descrita como um método o qual gera impressões digitais (fingerprints) de DNA que podem diferenciar bactérias entre gêneros e espécies. Neste estudo, o método de fingerprint foi usado para Staphylococcus aureus com o objetivo de avaliar a higiene de ordenha em duas fazendas leiteiras. Foram obtidos vários fingerprints de todos os isolados coletados das diferentes fontes estudadas (mãos de ordenhadores, tetos das vacas, leite e ordenhadeira), e foram obtidos comportamentos muito similares das bandas indicando que os isolados podem ser relatados como clones epidemiológicos. Em nosso estudo, a técnica mostrou ser eficiente para a análise da similaridade entre indivíduos da mesma espécie, no caso, o Staphylococcus aureus, mostrando ser uma ferramenta útil para investigação de falhas no manejo e, em um controle mais eficiente para evitar e/ou diminuir a disseminação de microrganismos causadores de sérias enfermidades em humanos e em animais, que podem ser transmitidas através de produtos como o leite e seus derivados.

Campylobacter jejuni, Campylobacter coli, Salmonella spp. e Yersinia enterocolitica isoladas de animais silvestres em um centro de reabilitação

“…Os perfis de bandas dos isolados de Y. enterocolitica analisados pela rep-PCR foram diferentes entre si (Fig.1). Outros estudos confirmam que a técnica de rep-PCR é eficiente na identificação de similaridade entre cepas da mesma espécie, e essa ferramenta pode ser utilizada para a investigação de como se dá a disseminação e contaminação de animais e humanos por micro-organismos patogênicos (Chapaval et al 2006). Esses resultados indicam que as cepas isoladas não eram clones, e sequer possuíam alguma similaridade entre elas, portando não possuiam uma origem comum recente.…”

Isolation and identification of Staphylococcus aureus from milk and milk products and their drug resistance patterns in Anand, Gujarat

“…The pathogenesis of from which they gain access to dairy products [3,4]. bacteria causing food-borne poisoning depends on Chapaval [5] found production of staphylococcal their capacity to produce toxins after ingestion (in the enterotoxins in milk when milk was stored at tempdigestive tract) or intoxication (ingestion of preformed eratures of 37 ºC to 42 ºC or when exposed to variations toxins in foodstuff). Among the bacteria predominantly in temperature.…”

Detecção de Streptococcus spp. Utilizando a Técnica de REP-PCR no Monitoramento da Qualidade do Leite de Cabra em Sala de Ordenha

“…A coleta foi realizada utilizando técnicas assépticas e conforme protocolos padrão e as amostras foram encaminhadas em caixa térmicas para o Laboratório de Bacteriologia da Embrapa Caprinos. O material coletado foi semeado segundo OLIVINDO (2007), para extração de DNA das cepas bacterianas utilizou-se o protocolo proposto por CHAPAVAL et al (2006), e, seqüencialmente, as reações de PCR foram realizadas segundo CHAPAVAL et al (2008). A análise das similaridades entre as cepas foi baseada na presença ou ausência de bandas específicas na análise da reação de PCR, onde diferenças e similaridades entre as cepas foram analisadas visualmente de acordo com o comportamento de migração das bandas dos produtos da reação de PCR.…”

“…A implementação do processo APPCC surge como uma alternativa dentro do ciclo de produção do leite de cabra apresentado, porém, questões ainda não referenciadas, como por exemplo, a falta de informações e dados, e as dificuldades de seleção dos Pontos Críticos de Controle (PCCs) para um número de perigos biológicos encontrados nas fazendas, onde há a impossibilidade de erradicar ou controlar a maior parte dos patógenos, especialmente aqueles que causam problemas clínicos em animais e que também podem causar danos à saúde humana, como: o Streptococcus spp. Assim, métodos baseados em DNA estão surgindo como vias confiáveis, simples e acessíveis para identificar e classificar microrganismos (CHAPAVAL et al, 2006). O método referido como REP-PCR, "impressão digital" do genoma, uma técnica baseada na amplificação do DNA, é tida como uma técnica extremamente confiável, reprodutível, rápida e discriminatória.…”