Application of Flow Cytometric Techniques to Veterinary Clinical Hematology

Abstract

Flow cytometry has emerged as a major new technology in veterinary clinical laboratories. Flow cytometers in current use include stand-alone instruments and cytometers incorporated into hematology analyzers. Flow cytometers offer rapid and quantitative analysis of a variety of cell types based on cell size, molecular complexity, and antigenic composition. Therefore, flow cytometry complements and extends knowledge that can be obtained by light microscopy. Stand-alone instruments are very flexible, however, this flexibility opens the instrument to obtaining invalid or misleading results. The recent development of monoclonal antibodies specific for epitopes on blood cells of food and companion animals has greatly expanded the spectrum of tests with potential clinical application. Tests that appear to have the greatest potential for routine application include reticulocyte and reticulated platelet enumeration, detection of erythrocyte-bound immunoglobulin, immunophenotyping of leukemias and lymphomas, and bone marrow differential cell counting. This report will briefly review the technical aspects of flow cytometry and then focus on techniques with present or potential application to the veterinary clinical laboratory.

Contagem de reticulócitos de cães saudáveis ou anêmicos pela citometria de fluxo

“…No grupo de cães controle, os coeficientes de variação das contagens de reticulócitos obtidos pelos dois métodos foram mais altos que os observados no homem (Ferguson et al, 1990) ou mesmo em cães (Weiss, 2002). O grupo-controle usado neste estudo era composto por cães da raça Beagle, do mesmo canil, de ambos os sexos e idade variando de 1,3 a 3 anos, isto é, animais muito bem controlados.…”

“…No homem, o intervalo estabelecido e aceito, por vários autores, é de 1,7%±0,52 (Ferguson et al, 1990;Oosterhuis et al, 1992;Tarallo et al, 1996). Em cães não há, até o momento, nenhum valor bem definido para a contagem de reticulócitos na citometria de fluxo (Weiss, 2002).…”

“…Vários autores verificaram maior sensibilidade da citometria de fluxo em relação à microscopia de luz, principalmente quanto à baixa contagem de reticulócitos (Nobes e Carter, 1990;Buttarello et al, 2001;Weiss, 2002 Cowgill et al, 2003;Petz e Garratty, 2004). Segundo Ferguson et al (1990) e Oosterhuis et al (1992), a correlação entre essas técnicas supracitadas em doadores de sangue é baixa.…”

“…Alguns exemplos são a acridina orange, tioflavina T e auramina. Entretanto, em meados dos anos 80, o thiazole orange (TO), um análogo da tioflavina T, foi produzido especialmente para a contagem de reticulócitos feita pela citometria de fluxo (Riley et al, 2001;Riley et al, 2002), tornando-se o corante de eleição para reticulocitometria em cães (Weiss, 2002).…”

Efeito do tempo de conservação de polimorfonucleares do sangue de bezerros sobre o metabolismo oxidativo e a atividade de fagocitose de Escherichia coli

“…Assim, este método de análise complementa e amplia os conhecimentos obtidos com a microscopia óptica. 2 A avaliação funcional dos PMN do sangue é normalmente realizada através da mensuração do metabolismo oxidativo e da atividade de fagocitose destas células. 3 As amostras de sangue devem ser processadas e analisadas o mais breve possível, já que o processo de estocagem da amostra é um ponto chave na obtenção de resultados precisos, sendo recomendado que as amostras sejam refrigeradas e processadas dentro de quatro horas após a colheita de sangue a fim de se evitar resultados falsos ou inconclusivos.…”