O objetivo deste trabalho foi verificar a capacidade lipolítica de linhagens de leveduras isoladas de frutos de diferentes espécies de palmeiras do cerrado Tocantinense em meio sólido contendo Tween 20 nas temperaturas, 25, 35 e 40 ºC avaliando-se o índice enzimático (IE). Avaliou-se também o efeito do pH, agitação, concentração de sulfato de amônio (NH4)2SO4 e extrato de levedura em cultivo submerso para as duas linhagens que apresentaram o maior valor de IE, através de um planejamento de Plackett-Burman (PB), para isso, foi realizado um estudo exploratório, laboratorial de natureza quantitativa. Das 150 linhagens testadas 24 (16%) apresentaram resultados positivos a 25 ºC, 12 (8%) a 35 ºC e nenhuma linhagem apresentou atividade a 40 ºC. Os maiores valores de IE obtidos foram de 6,0 e 5,0 a 25 ºC para as linhagens T194 e T199, respectivamente. Os resultados do PB mostraram que apenas o (NH4)2SO4 apresentou influência significativa para a produção de lipases, com valores variando de 34,3 (T194) e 43,6 U.mL-1 (T199). Foi realizado um delineamento inteiramente casualizado com diferentes níveis de concentração de (NH4)2SO4 e observou-se que não houve efeito significativo para a linhagem T194, porém as concentrações de 30 e 35 g.L-1 apresentaram efeito significativo para a linhagem T199, as atividades variaram de 61,0 e 70,1 U.mL-1. A adição de o sulfato de amônioao meio de cultura elevou a produção de lipase da linhagem T194 de 34,3 para 60 U.mL-1 e de 43,6 para 70,1 U.mL-1 para a linhagem T199.