Objetivo: analisar as características de barreira física e biológica de campos de algodão, que são utilizados como sistema de barreira estéril, após múltiplos usos e processamentos na prática clínica. Método: estudo longitudinal observacional de acompanhamento e de avaliação de tecido 100% algodão que foi utilizado como sistema de barreira estéril em um hospital de médio porte. Amostras foram coletadas antes do uso (após três lavagens) e com três, seis, nove, 12 e 15 meses de uso e avaliadas quanto ao número, à espessura e à integridade dos fios, peso, absorção de água e penetração úmida de micro-organismos. Resultados: após 85 lavagens, o número de fios permaneceu inalterado, porém aumentaram-se as fibras desfiadas e o volume de água absorvido. O teste microbiológico utilizando metodologia padrão alemão obteve resultado negativo; já o de penetração de úmida de micro-organismos não apresentou mudanças significativas ao longo do tempo, embora uma fração das células microbianas tenham passado pelas amostras de dupla camada. Conclusão: as propriedades físicas do tecido 100% algodão, utilizado como sistema de barreira estéril, alteraram com usos/processamentos; entretanto essas não interferiram significativamente nos resultados obtidos pelos testes realizados na barreira microbiológica até 85 lavagens.