Avaliação da integridade cromatínica de espermatozóides de galos (Gallus gallus, Linnaeus, 1758) de linhagem pesada em duas idades

Abstract

Na avicultura, a avaliação de fertilidade em machos é de extrema importância, para garantir uma melhor produção de ovos férteis. As técnicas para avaliação de fertilidade em galos são pouco exploradas, sendo que na maioria das vezes, a avaliação é feita por amostragem e levando em consideração, apenas fatores morfofisiológicos, diretamente relacionados com o espermatozóide. Mas é sabido que, em outras espécies, além dos fatores morfofisiológicos, existem problemas intrínsecos ao espermatozóide, como a baixa compactação da cromatina, que pode levar a disturbios de fertilidade, que na maioria das vezes não são diagnosticados. O objetivo desse trabalho foi a adaptação de técnicas de avaliação da cromatina, já descritas em outras espécies, para aves de linhagem pesada (Gallus gallus, Linnaeus, 1758), correlacionando as alterações cromatínicas com as alterações morfológicas e com a fertilidade. Para tanto, sêmen de galo com diferentes níveis de fertilidade, foram utilizados em diferentes métodos para identificação de alterações na cromatina, utilizando os corantes azul de toluidina e alaranjado de acridina. As avaliações demonstraram que esfregaços de sêmen fresco de galo com posterior fixação geram artefatos que levam a alterações na forma da cabeça e na integridade da cromatina, não sendo indicados em métodos de avaliação de fertilidade. Apesar de todos os métodos testados apresentarem falhas metodológicas e um certo grau de subjetividade, o método que gerou melhores resultados foi a mistura de uma gota de sêmen conservado em formol salina e uma gota do alaranjado de acridina sobre lâmina de microscopia, com posterior secagem e observação em microscopia de fluorescência com filtro de excitação azul. Pelo método verificou-se que alterações na compactação da cromatina de espermatozóides de galo geralmente não são acompanhadas por alterações morfológicas e que geralmente as alterações morfológicas de espermatozóides de galo são acompanhadas por alterações na compactação da cromatina e que esse é um importante fator na determinação da fertilidade de galos.

Sperm morphometry and chromatin condensation in Nelore bulls of different ages and their effects on IVF

“…In case of changes in chromatin structure, morphologic abnormalities are expected [3,10,11]. However, some studies have shown that sperm containing abnormal chromatin condensation do not necessarily present morphologic changes, requiring morphologic analysis followed by evaluation of the internal structure [12,13].…”

L-arginine supplementation minimizes aging-induced changes in the sperm chromatin of roosters

“…A semen sample was collected from each box on the day the treatments started, that is, when the roosters were 52-wk-old, and another sample 6 wk later, when they were 58-wk-old. A drop of semen from each sample was placed into a microtube containing 1.5 mL of formaldehyde saline ( Soares and Beletti, 2006 ) and sent to the Reproductive Biology Laboratory of the Federal University of Uberlândia for chromatin analyses. Therefore, using cloacal massage ( Wilson, 1988 ), 12 samples were collected from each group (6 samples before and 6 samples after the experimental period), totaling 48 samples.…”

“…The techniques of fertility research in roosters are little explored, most of the time, performed by sampling and considering only morphological and motility factors, not being routinely evaluated for sperm chromatin ( Soares and Beletti, 2006 ). Several methods to identify changes in sperm chromatin have been tested, being sperm chromatin structure assay ( SCSA ) the most frequently used to analyze rooster semen ( Partyka et al, 2010 ; Salehi et al, 2020 ; Shabani et al, 2022 ).…”

“…Another simple, easy-to-perform and low-cost alternative to identify sperm chromatin changes from roosters is the smear stained with toluidine blue, evaluated visually. However, it is highly subjective, since the identification of spermatozoa with chromatin change is performed by color differentiation, where normal spermatozoa are stained from green to light blue and those with chromatin decompacted are usually stained from dark blue to magenta ( Soares and Beletti, 2006 ). Computational image analysis of smear stained with toluidine blue is an alternative to decrease this subjectivity and increase repeatability ( Rodrigues et al, 2009 ).…”

Relação do tempo de armazenamento dos espermatozoides no oviduto de peruas com a fertilidade e desenvolvimento embrionário

“…A teoria da estratificação pode explicar os resultados obtidos no trabalho, onde quanto mais velhos os espermatozoides penetrando a membrana perivitelina, menor a fertilidade encontrada. Soares e Beletti (2006) (BELETTI, 2013). Dessa forma, estudos posteriores são necessários para verificar as alterações que ocorrem nos espermatozoides enquanto armazenados nos TAE após a inseminação e que podem interferir na formação embrionária.…”