Avaliação da sensibilidade da técnica computadorizada de análise (CASA) para a determinação da concentração espermática do sêmen bovino congelado

Abstract

Sperm concentration is traditionally evaluated by counting cells in a hemocytometric Neubauer chamber, often a highly subjective, time-consuming, and laborious technique prevalent in andrology laboratories around the world. However, the Computer-Assisted Semen Analysis (CASA) represents a more consistent method of evaluating sperm concentration that may provide enhancing efficiencies of sperm count. The purpose of this study is to compare the results of these two methods in the analysis of post-thaw concentration of bovine semen. Four hundred and twenty five batches of semen from different bulls were selected, thawed at 37°C for 30 seconds and then homogenized. Aliquots of 40 μL of semen were diluted in 960 μL of distilled water, fixing the rate at 1:25 dilution for analysis in a Neubauer chamber. Conversely, aliquots of 5 μL for each semen dose were submitted to CASA, considered a minimum of five random fields and 2000 sperm count per analysis. The average concentration of sperm cells was 38.96 a ± 1.28 in the Neubauer analysis and 35.14 b ± 0.82 for the CASA, with the correlation coefficient of 0.87 (P < 0.0001) and reliability of 0.78 (scale ranging from 0 to 1) between the two methods. In conclusion, the results of two techniques for assessing sperm concentration have similar results. However the CASA methodology would yield greater benefit due to precision, consistency, and reduced disposal issues, particularly for large processing laboratories. Keywords: Bull semen. CASA. Neubauer. Sperm concentration. ResumoTradicionalmente, a concentração espermática é avaliada por meio da contagem de células em câmara hemocitométrica de Neubauer, técnica laboriosa adotada na rotina dos laboratórios de andrologia. Uma alternativa para essa contagem é a técnica computadorizada de avaliação espermática (CASA), método que pode aumentar a eficiência e acurácia na determinação da concentração de espermatozoides em uma amostra de sêmen. O presente trabalho relata a avaliação da sensibilidade da técnica CASA para o acesso da concentração de espermatozoides bovinos em pós-descongelação. Foram selecionadas 425 doses de sêmen de reprodutores de diferentes raças, descongeladas a 37°C por 30 segundos e homogeneizadas. Alíquotas de 40 µL de sêmen foram transferidas para tubos cônicos de 1,5 mL previamente preenchidos com 960 µL de água destilada, fixando a taxa de diluição em 1:25 para contagem em câmara de Neubauer. Em contrapartida, alíquotas de 5 µL de cada dose de sêmen foram avaliadas com o emprego do sistema CASA considerando o número mínimo de cinco campos aleatórios e 2 mil espermatozoides por análise. A concentração média de células espermáticas foi de 38,96 a ± 1,28 e 35,14 b ± 0,82, respectivamente para amostras avaliadas em câmara de Neubauer ou sistema computadorizado, apresentando o coeficiente de correlação de 0,87 (P < 0.0001) e concordância de 0,78 (escala de 0 a 1). Conclui-se que as duas técnicas de avaliação da concentração espermática possuem eficiência similar. No entanto, em virtude da precisão, rapidez...

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“…The semen samples were submitted to computer analysis of sperm motility (CASA) using IVOS II System v. 12.3 (Hamilton-Thorne, USA). CASA analysis was adapted from Crespilho et al (2017). Frozen semen was thawed and warmed to 38°C.…”

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“…ISAS ® , Valencia, Spain). The software settings were those recommended by the manufacturer for the analysis of bull semen motility and concentration, according to Crespilho et al (2017). Every sample constituted a minimum of five random fields and 2000 spermatozoa per analysis.…”