Avaliação da toxicidade celular do glifosato sobre as gônadas de Danio rerio (Cyprinidae)

Abstract

Os herbicidas são muito utilizados na agricultura por substituírem a mão-de-obra na capina, diminuindo consequentemente o esforço exigido pelo trabalho, e otimizando o tempo dos agricultores, mas em uma concentração elevada pode trazer malefícios para organismos aquáticos podendo provocar alterações moleculares e celulares que afetarão a morfologia, fisiologia e bioquímica dos tecidos. Dentre os agrotóxicos, o organofosforado glifosato é um dos herbicidas mais usados no Brasil e no mundo. Considerando a importância de reconhecer as alterações macroscópicas e mutagênicas na avaliação da toxicidade do herbicida glifosato, amplamente utilizado na agricultura, foi utilizado neste estudo, como modelo experimental, o peixe Danio rerio. O estudo teve como objetivo avaliar os efeitos subletais de toxicidade do herbicida glifosato sobre a morfologia nos ovários de D. rerio e analisar o percentual de micronúcleo nos peixes expostos às concentrações de glifosato. Os peixes foram divididos em dois grupos, sendo um exposto ao herbicida a uma concentração 65 µg/L diluído em água, determinado pela Resolução do Conselho Nacional do Meio Ambiente (CONAMA) Nº 357, de 17 de março de 2005, que estabelece a concentração de 65 µg/L de glifosato em águas dos rios no Brasil. O outro grupo de peixes foi utilizado como controle, mantidos em água isenta de herbicida. Verificou-se um aumento significativo na massa dos ovários, bem como um aumento significativo no índice gonadossomático (IGS) em ovários de peixes expostos ao glifosato por um período de 15 dias. Em relação ao percentual de micronúcleo dos eritrócitos os grupos não diferiram estatisticamente entre si. Mesmo na concentração de glifosato regulamentada para os rios do Brasil, efeitos subletais tóxicos foram identificados nos ovários. Desta forma, sugere-se a realização de testes toxicológicos para avaliação de parâmetros reprodutivos. Os efeitos adversos do glifosato sobre os ovários demonstradas aqui representam um importante risco para a reprodução de peixes.

Análise dos efeitos do glifosato e sua formulação Roundup® nas células e gônadas dos peixes Danio rerio (Cyprinidae)

“…A água permaneceu em aeração por um período de cinco dias, permitindo as trocas gasosas para a remoção total do cloro presente na água e evitando, assim, a morte dos peixes no momento de alocação nos aquários testes. Os peixes permaneceram por um período de cinco dias de aclimatação em condições de aeração constante e fotoperíodo natural; (15) as fêmeas e machos adultos de D. rerio foram divididos em quatro aquários contendo dez indivíduos cada (n=40). O glifosato ativo e o produto formulado Roundup ® utilizados nos tratamentos foram adquidos comercialmente.…”

“…(4) Para garantir o bem-estar dos peixes na sua permanência em laboratório, foram utilizados métodos específicos para manutenção do D. rerio, no qual recomenda-se a temperatura entre 26 °C e 28 °C, que foi mantida através do termostato, aeração direta para trocas gasosas e parâmetros de pH entre 6,8 e 7,5, assim como fotoperíodo natural e alimentação com ração específica para peixes (Alcon Basic ® ) duas vezes ao dia. (18) Para monitoramento dos parâmetros de qualidade da água, foram realizadas medidas para a verificação de pH, temperatura (°C) e oxigênio dissolvido a cada 24 horas de exposição, (15) bem como a observação das condições de higiene dos aquários e a saúde dos peixes. Em casos de ocorrência de doença ou morte os peixes eram retirados e descartados adequadamente.…”

“…Em seguida, os MNs foram identificados em aumento de 1000x (Figura 2). Foram analisados 2.000 eritrócitos por peixe, (15) totalizando três lâminas por aquário. Para melhor confiabilidade da avaliação dos micronúcleos (MNs) foram seguidos os critérios estipulados: (a) apresentar tamanho inferior a 1/3 do núcleo principal; (b) não refrativos; (c) presença de coloração e intensidade equivalente ao núcleo principal e (d) posição intracitoplasmática, mas sem tocar o núcleo principal.…”

“…(32) Outros estudos propuseram que o aumento do IGS pode estar relacionado com a elevação na expressão da biossíntese de hormônios esteróides nas fêmeas de Danio rerio expostas ao herbicida glifosato, o que poderia ter ocasionado alterações no eixo hipotálamo-hipófise-gonadal, induzindo, assim, a maturação ovariana. (15) Pesquisas sobre a influência do glifosato nos ovários de Danio rerio demonstraram que a elevação nos valores de índice gonadossomático foi resultante do avanço da maturação ovariana, associado à maior expressão do fator esteroidogênico 1 (SF-1), considerado o principal regulador da formação de hormônios esteroides. (23) Destarte, sugere-se que o aumento de índice gonadossomático nas fêmeas de Danio rerio pode estar relacionado a alterações hormonais ocorridas nas gônadas dos peixes, decorrente da exposição a estes xenobióticos, uma vez que agrotóxicos foram considerados capazes de gerar distúrbios endócrinos nas fases iniciais de desenvolvimento dos peixes, bloqueando hormônios sexuais e interferindo no desenvolvimento sexual normal desses animais.…”

“…(9) Massa e maturação gonadal Peixes da espécie Danio rerio expostos por 15 dias a uma concentração do herbicida glifosato apresentaram aumentos na massa dos ovários de forma significativa em relação a peixes não expostos, demonstrando certa capacidade deste composto em interferir na reprodução destes organismos. (15) Ademais, fêmeas de Danio rerio submetidas ao glifosato demonstraram aumentos significativos nos diâmetros dos ovócitos, assim como danos ultraestruturais através da formação de membranas concêntricas, podendo acometer as funções dos ovócitos logo após a fertilização. (23) Peixes da espécie Austrolebias nigrofasciatus expostos a concentrações de um herbicida comercial à base de glifosato, também apresentaram redução no...número...de...embriões...fertilizados,...porém exibiram elevados aumentos em seus diâmetros, bem como diminuição na tolerância térmica embrionária.…”