Avaliação de novos insumos e reagentes para viabilizar a conservação do Kit EIE Leishmaniose Canina entre 2 e 80 C

Abstract

Introdução:A Leishmaniose Visceral Canina (LVC) continua sendo um problema de saúde pública. Esta doença é causada pelo protozoário Leishmania, sendo a Leishmania chagasi responsável por esta infecção no Brasil. Cães domésticos são um dos reservatórios do parasito e quando são picados pelo flebótomo, vetor desta doença, podem infectar os seres humanos. Apesar das medidas de controle, as notificações por Leishmaniose têm aumentado constantemente. O diagnóstico precoce e correto é muito importante, pois ajuda na prevenção e controle da doença. Bio-Manguinhos/Fiocruz-RJ, desde 2004, vem produzindo o conjunto diagnóstico para atender à demanda do Ministério da Saúde. Com a alteração do algoritmo de testagem da Leishmaniose Canina, houve a necessidade da manutenção do fornecimento do teste Elisa que passou a ser usado como confirmatório, sendo imprescindível a otimização nos processos de estocagem e transporte, facilitando a sua utilização pelo usuário final e possibilitando a redução de custos.Objetivo: Neste estudo testamos reagentes comerciais que possibilitem a armazenagem e o transporte de todo o kit entre 2 e 80 C. Atualmente, parte dos reagentes é mantida a -200C e outra sob refrigeração, o que implica em maior complexidade logística tanto de transporte como de estocagem e, consequentemente, maior custo.Metodologia: Resultados obtidos em ensaios com placas de Elisa sensibilizadas com antígeno de Leishmaniose (L.Major) e mantidas a -200C foram comparados aos obtidos com placas sensibilizadas com o mesmo antígeno e mantidas entre 2 e 80C. Nestas últimas, adicionouse um estabilizante que previne degradação e desnaturação, além de bloquear qualquer sítio livre na superfície da placa, minimizando possíveis reações cruzadas. Para mantermos o conjugado entre 2 e 80C, o mesmo foi diluído 1:10 em estabilizante e testado em ensaio imunoenzimático, comparando-se os resultados obtidos com os resultados do conjugado diluído em PBS-glicerol 80% e mantido a -200C. Para a conservação dos controles positivo e negativo, adicionouse 0,2% de azida sódica a fim de evitar contaminações no kit mantido entre 2 e 80C. Estes controles foram testados para avaliarmos possíveis interferências da azida sódica e a performance em relação aos mantidos à -200C.