Avaliação do sistema quantitative buffy coat (QBC) no diagnóstico laboratorial da infecção pelo Trypanosoma cruzi: estudo em modelo experimental murino

Abstract

Para esclarecer o diagnóstico da doença de Chagas é imprescindível a c o n firm a çã o etiológica, dependente da utilização de diversos tip o s de p ro c ed im en to s, que d em o n stram o T r y p a n o s o m a c r i i z i ou participam revelando a natureza do processo através de anticorpos, por exemplo14.A fase aguda pode apresentar-se através de manifestações clínicas sugestivas, mas é definida segundo critério laboratorial, ou seja, a evidenciaçào do T. c r u z i no sangue periférico por meio de métodos rotulados como diretos e representados por exames a fresco ou após coloração, com concentração ou não. Contudo, torna-se necessário lembrar que ainda são desejáveis aprimoramentos, so b re tu d o q u a n d o v igentes p eq u e n as parasitemias. Ainda mais, até em estudos experimentais, baseados no emprego de modelos que se utilizam de animais, vale a pena almejar progressos, para melhorar avaliações patogenéticas e terapêuticas entre outras.Quando tomamos conhecimento do valor do sistema Q uantitative B uffy Coat (QBC) no diagnóstico específico da malária, em virtude da eficiência para mostrar hematozoários no sangue, julgamos aconselhável tentar verificar a aplicabilidade dessa técnica em relação ao T. c r u z i e, de início, realizamos observações recorrendo a camundongos intencionalmente infectad o s. Agora, en tão , relatam os os resultados obtidos.Material e Métodos. Cinco camundongos fêmeas, da linhagem Balb-C, pesando entre 18 e lüg cada um, forma inoculados pela via intraperitoneal com 10' formas trípomastigotas da cepa Y do T. cruzi, mantida há muitos anos no Laboratório. Decorridos sete dias, efetuamos punçào cardíaca total, usamos citrato de sódio a 3.5% como anticoagulante e agrupamos em um único ''pool", no qual contamos os flagelados empregando a câmara de Neubauer. Pusemos o sangue assim coletado em dez tubos capilares contendo laranja de acridina, atingindo o volume médio de 60 microlitros; homogeneizamos, colocamos rolha de silicone em uma das extremidades e bastonete de plástico, denominado flutuador, na outra; centrifugamos a 12.000rpm durante cinco minutos, para subseqüêntemente observar sob luz ultra-violeta, em m icro scó p io de fluorescência, com objetiva de 60X e grande p ro fu n d id a d e de cam po; co n tam o s e expressamos os resultados segundo o número médio concernente a dez capilares.Para analisar a sensibilidade da técnica, juntamos sangue do "pool" ao de camundongos não in fectad o s, a fim de co n se g u ir concentrações de 1/20 a 1/10 240. De cada uma delas pusemos amostra em um tubo capilar e contamos.Comentários. .Nos capilares, notamos nítida separação em diferentes camadas: plasma, plaquetas, mononucleados, granulócitos e hemácias. Aparece coloração esverdeada, fluorescente, nos núcleos, facilitando a i n d e n t i f i c a ç ã o . Q u a n to às fo rm a s trípomastigotas, elas são vistas apresentando grande motilidade e intensa fluorescência em cinetoplastos e núcleos, que é mais discreta nos citoplasmas.A distribuição dos parasitas nos tubos pode ser expressa como est...

"Comparação da reação em cadeia da polimerase com o exame microscópico na detecção do Trypanosoma cruzi em amostras procedentes do trato digestório do Triatoma infestans"

“…Optou-se pela repetição da PCR em triplicata toda vez que o teste fosse negativo após a primeira amplificação, pelo fato da seqüência alvo de amplificação ser repetitiva, e as repetições ocorrerem em "tandem", isto é, todas em um mesmo cromossomo e contíguas. Esta característica faz com que exista a possibilidade da ocorrência de fenômeno do tipo "tudo ou nada", isto é, da (Umezawa E e Braz, LMA, 1997, Amato-Neto et al, 1996 Pela técnica do micro-hematócrito, centrifuga-se aproximadamente 50 ml de sangue, em tubo capilar, a 3.500 rpm, por 5 minutos. Posteriormente, cortase o tubo na altura do creme leucocitário e coloca-se aproximadamente 5 µl do creme em lâmina, cobre-se com lamínula e examina-se em microscópio óptico, aumento de 400X.…”