Introducción: En neonatos y lactantes bajo 90 días de vida la fiebre constituye un signo clínico relevante ya que puede corresponder a una infección bacteriana grave, por lo que se toman hemocultivos de forma rutinaria y el paciente es hospitalizado. Aún no existe una recomendación respecto al tiempo de observación necesario una vez internado el paciente. Objetivo: Describir las bacterias aisladas en hemocultivos de lactantes bajo 90 días de vida hospitalizados por fiebre y el tiempo de detección de crecimiento microbiano en los mismos. Métodos: Estudio descriptivo, retrospectivo. Se revisaron hemocultivos positivos tomados entre 2014 y 2016 en neonatos y lactantes < 90 días de edad. Se obtuvieron las identificaciones, tiempo de positividad de las bacterias, así como datos clínicos, de laboratorio y demográficos. Resultados: Se identificaron 172 hemocultivos positivos, 51 cumplían los criterios de inclusión. De éstos, 21 microorganismos fueron patógenos (Escherichia coli: 10, Streptococcus agalactiae: 3, Streptococcus pyogenes: 3, otros: 5) y 30 se consideraron contaminación, principalmente Staphylococcus coagulasa negativa. En relación al total de la muestra, la mediana del tiempo de positividad fue de 10 h. A las 24 h de cultivo se detectó crecimiento bacteriano en 94% de la muestra. Conclusiones: Las bacterias patógenas aisladas en los hemocultivos de pacientes < 90 días de edad, que ingresaron con fiebre, corresponden principalmente a bacilos gramnegativos y estreptococos. Todos los patógenos aislados fueron detectados antes de 24 h de incubación.