Several Pterygoplichthys species, members of the Neotropical catfish family Loricariidae, have been widely introduced outside their native ranges. In this paper, I present observations on the diel activity pattern of non-native Pterygoplichthys, tentatively identified as P. disjunctivus, with respect to their attachment and grazing on endangered Florida manatees, Trichechus manatus latirostris. The study was conducted in December 2009 at Volusia Blue Spring, an artesianal spring system in the St. Johns River basin, Florida (USA). Supplemented by information gathered during previous visits to the spring site, this study revealed that adult Pterygoplichthys are active throughout the diel period (day, twilight and night). However, juvenile Pterygoplichthys were largely nocturnal and only at night did they consistently join adults in attaching to manatees. The juveniles generally remain hidden during the day, probably responding to presence of diurnal predators, mainly birds. Differences in diel behaviors among different Pterygoplichthys size classes in Florida are consistent with published observations on loricariids inhabiting clearwater streams within their native ranges.Várias espécies de Pterygoplichthys, siluriformes Neotropicais da família Loricariidae, tem sido largamente introduzidos além de suas áreas naturais de ocorrência. Neste artigo, eu apresento observações dos padrões de atividade diária de uma população não nativa de Pterygoplichthys, identificada tentativamente como P. disjunctivus, associados com a espécie ameaçada de peixe-boi nativa da Flórida, Trichechus manatus latirostris. O estudo foi conduzido em dezembro de 2009 em Volusia Blue Spring um sistema artesiano na bacia do rio St. John, Flórida (USA). Suplementado por informações reunidas durante visitas prévias ao sítio em análise, este estudo revelou que Pterygoplichthys adultos estiveram ativos durante a maioria dos períodos (dia, crepúsculo e noite). No entanto, jovens foram principalmente noturnos e somente a noite eles uniram-se aos adultos sobre os peixes-boi. No sistema estudado na Flórida, jovens de Pterygoplichthys geralmente permanecem escondidos durante o dia, provavelmente respondendo a presença de predadores visuais diurnos, principalmente aves. As diferenças observadas na atividade diária entre diferentes classes de tamanho são semelhantes ao descrito para certos loricariídeos que habitam cursos d'água de águas límpidas em suas áreas nativas de ocorrência.