Biological and immunological activity in bovine luteinizing hormone charge isoforms

Abstract

RESUMENLa hormona luteinizante (LH) sufre modificaciones postraduccionales que dan origen a isoformas de carga. El estudio determinó la actividad biológica (B) e inmunológica (I) de distintas isoformas de LH bovina. Las isoformas se aislaron mediante el cromatoenfoque a partir del extracto glicoprotéico obtenido de lóbulos anteriores de hipófisis de bovino. La actividad biológica se evaluó en un bioensayo in vitro midiendo la producción de AMPc. La actividad inmunológica se midió con un radioinmunoensayo (RIA) específico para LH. El USDA-bLH-B5 se utilizó como referencia. Las isoformas se agruparon tomando como referencia el rango de pH de elución, en básicas (A, pH, 10.75-9.75; B, pH, 9.58-8.41), neutras (C, pH, 7.98-6.89) y ácidas (D, pH, 6.88-5.41; E, pH, 5.36-3.46). El peso molecular del heterodímero de cada isoforma y del estándar fue similar, estimado en 36.5 kDa. La actividad inmunológica y biológica se comportó de forma dosis-dependiente. Con respecto al estándar, se requirió una mayor concentración de proteína de cada isoforma para obtener el IC50 en la curva de inhibición. En el bioensayo, el valor EC50 para la producción de AMPc fue significativamente diferente entre isoformas; la isoforma neutra mostró un EC50 inferior lo que se interpretó como la proteína más bioactiva, en contraste, la isoforma ácida, mostró un valor de EC50 superior y resultó ser la menos bioactiva; la básica tuvo un comportamiento intermedio (P<0.05). En conclusión, los resultados sugieren un efecto diferenciado de las isoformas de carga, sobre la producción cuantitativa de AMPc por unidad de LH inmunoreactiva. PALABRAS CLAVE: Hormona luteinizante, Actividad biológica, Actividad inmunológica. ABSTRACT Luteinizing hormone (LH) undergoes posttranslational modifications that originate different charge isoforms. The study evaluated the differences in biological (B) and immunological (I) activity between isoforms of bovine LH.Isoforms were isolated by chromatofocusing from anterior pituitary glycoprotein extract. The biological activity was evaluated in an in vitro bioassay. Immunological activity was measured with a radioimmunoassay (RIA) specific for LH. The USDA-bLH-B5 standard was utilized as the reference. LH isoforms were grouped by their pH range of elution, in basic (A, pH, 10.75-9.75; B, pH 9.58-8.41), neutral (C pH, 7.98-6.89) and acidic (D, pH, 6.88-5.41; E, pH 5.36-3.46). The molecular weight of the heterodimer of each isoform was similar to the LH standard, estimated to be 36.5 kDa. Immunological and biological activity behaved in a dose-dependent manner. With respect to the LH standard, all isoforms required higher protein concentration to reach the IC50 of the inhibition curve. In the bioassay EC50 value for cAMP production was significantly different among isoforms; the neutral isoform showed a lower EC50 which was interpreted as more bioactive, the acidic isoform E showed an EC50 being the least bioactive and the basic was intermediate (P<0.05). In conclusion, the results suggest a quantitative effect of LH charge iso...

Administración de lutropina (r-hLH) y su respuesta en la tasa ovulatoria y embriones viables en ovejas Pelibuey

“…La concentración de LH inmunoreactiva se midió con un radioinmunoensayo en fase líquida, para LH bovina (12). El trazador se formó con la incorporación del NaI125 al USDA-bLH-B5-AFP11743B, con el método del IODO-GEN (13) in basic (A, pH, 10.75-9.75; B, pH 9.58-8.41. La misma proteína se empleó como referencia a las dosis de 0.1, 0.5, 1.0, 2.5, 5.0 y 10 ng tubo -1 en cuatro replicas.…”