Os biossurfactantes são compostos de superfície ativa, sintetizada por diversos microrganismos e que têm recebido crescente interesse pelas vantagens que possuem sobre os surfactantes químicos, tais como biodegradabilidade, baixa toxicidade e produção a partir de fontes de baixo custo e resíduos industriais. O presente trabalho teve por objetivo avaliar a produção de biossurfactantes por Aspergillus fumigatus a partir do caldo do sisal (Agave sisalana) o qual foi utilizado como fonte de carbono. Foi empregada fermentação submersa por período de 192 horas utilizando o fungo filamentoso Aspergillus fumigatus. Amostras foram coletadas a cada 24 horas após o inóculo. Analisamos a produção por meio do consumo do substrato, biomassa, Índice de Emulsificação (IE), Estabilidade após 24 horas e Atividade de Emulsificação. Obtivemos os melhores resultados no tempo de 144 horas de fermentação, mantendo uma estabilidade acima de 90% com valor de pH ácido em torno de 4,74, 17,65g.L-1 de biomassa e Unidades Atividade de Emulsificação de 1,70. No planejamento fatorial 2², com triplicata no ponto central, foram analisadas as variáveis temperatura (4ºC, 30ºC, 45ºC) e salinidade (0%, 5%, 10%) em presença de óleo diesel e querosene ao longo de 60 minutos sobre o comportamento do IE. Os resultados mostraram que em presença do óleo diesel nenhum dos parâmetros avaliados tiveram influência no comportamento do IE, e os Ensaios 2 e 4 obtiveram os melhores resultados em presença de querosene, sendo constatado que nos ensaios com o querosene a temperatura foi o fator que mais influenciou no comportamento do IE. Portanto, os resultados indicam que o caldo do sisal é um substrato adequado para a produção de biossurfactantes por Aspergillus fumigatus apresentando potencial de aplicação em processos industriais e ambientais.