c-mip Impairs Podocyte Proximal Signaling and Induces Heavy Proteinuria

Abstract

Idiopathic nephrotic syndrome comprises several podocyte diseases of unknown origin that affect the glomerular podocyte, which controls the permeability of the filtration barrier in the kidney to proteins. It is characterized by the daily loss of more than 3 g of protein in urine and the lack of inflammatory lesions or cell infiltration. We found that the abundance of c-mip (c-maf inducing protein) was increased in the podocytes of patients with various acquired idiopathic nephrotic syndromes in which the podocyte is the main target of injury. Mice engineered to have excessive c-mip in podocytes developed proteinuria without morphological alterations, inflammatory lesions, or cell infiltration. Excessive c-mip blocked podocyte signaling by preventing the interaction of the slit diaphragm transmembrane protein nephrin with the tyrosine kinase Fyn, thereby decreasing phosphorylation of nephrin in vitro and in vivo. Moreover, c-mip inhibited interactions between Fyn and the cytoskeletal regulator N-WASP (neural Wiskott-Aldrich syndrome protein) and between the adaptor protein Nck and nephrin, potentially accounting for cytoskeletal disorganization and the effacement of foot processes seen in idiopathic nephrotic syndromes. The intravenous injection of small interfering RNA targeting c-mip prevented lipopolysaccharide-induced proteinuria in mice. Together, these results identify c-mip as a key component in the molecular pathogenesis of acquired podocyte diseases.

Mécanismes moléculaires du syndrome néphrotique idiopathique à rechutes

“…Nous avons confirmé par des expériences de co-immunoprécipitation croisée que Fyn est un partenaire de c-mip [16], et démontré que c-mip interagissait in vitro avec Fyn et que cette interaction physique pouvait être directe [16]. La liaison de c-mip avec Fyn empêche celle-ci de se lier à la néphrine qui ne peut plus être phosphorylée.…”

“…Ce méca-nisme a pu être vérifié in vivo dans le modèle murin de souris transgénique exprimant c-mip humaine ainsi que dans les modèles expérimentaux de syndrome néphrotique. Ce résultat est corroboré par l'analyse des biopsies de malades atteints de SNI où nous avons pu montrer que la surexpression de c-mip était associée à une inhibition importante de la phosphorylation de la néphrine [16]. La liaison de c-mip avec Fyn a deux autres conséquences fonctionnelles sur le remaniement normal du cytosquelette.…”

“…La protéine N-WASP, qui joue un rôle clé dans la réorganisation du cytosquelette podocytaire et qui est naturellement phosphorylée par Fyn, est inactivée en présence de c-mip ( Figure 5). Ces évé-nements ont été démontrés in vitro et in vivo dans des modèles murins [16]. Ces résultats indiquent que la surexpression de c-mip dérégule des voies de signalisation critiques pour les fonctions podocytaires et permettent d'expliquer la protéinurie massive et la fusion des Fyn phosphoryle plusieurs résidus tyrosine carboxy-terminaux de la néphrine, recrutant des protéines kinases et des protéines adaptatrices qui se lient ensuite à la néphrine via leurs domaines SH2.…”

“…Nous avons utilisé le modèle murin de protéinurie induite par le LPS. Dans ce modèle, l'injection de LPS entraîne 24 heures plus tard une protéinurie importante [17], concomitante de l'induction de c-mip [16]. Pour vérifier que le siARN était efficacement incorporé dans le podocyte, nous l'avons couplé à un fluorochrome.…”

“…Les souris ont reçu les siARN par voie veineuse 30 minutes avant l'injection de LPS, puis elles ont été mises dans des cages métaboli-ques pour recueillir la protéinurie des 24 heures. Les souris ayant reçu le LPS seul ou le LPS avec Invivofectamine ® développaient une protéinurie massive ; au contraire, la protéinurie des souris ayant reçu du LPS plus des siARN c-mip était réduite de plus de 80 % [16]. Les analyses par microscopie confocale ont montré qu'une quantité significative de siARN était incorporée dans les podocytes.…”