Chromosome Banding Analysis of Peripheral Blood Lymphocytes Stimulated with IL-2 and CpG Oligonucleotide DSP30 in Patients with Chronic Lymphocytic Leukemia

Abstract

hematologická a onkologická klinika, Centrum molekulární bio logie a genové terapie, LF MU a FN Brno 2 Oddělení lékařské genetiky, laboratoř molekulární cytogenetiky, LF MU a FN Brno 3 CEITEC-Středoevropský technologický institut, MU, Brno Souhrn Východiska: Chromozomové změny patří u chronické lymfocytární leukemie (CLL) mezi významné prognostické faktory. Hlavní metodou využívanou k detekci těchto chromozomových změn je fl uorescenční in situ hybridizace (FISH), klasické cytogenetické vyšetření vyžadující buňky v metafázi je u CLL problematické kvůli nízké proliferační schopnosti maligních B-lymfocytů in vitro. V roce 2006 byla publikována metoda umožňující získat metafázní B-lymfocyty u CLL s využitím stimulace pomocí IL-2 a CpG oligonukleotidem DSP30. Cílem naší studie bylo ověřit účinnost stimulace a zhodnotit využitelnost této metody v rutinní praxi. Soubor pacientů a metody: Celkem u 369 pacientů s dia gnózou CLL byla vyšetřována periferní krev klasickou cytogenetickou metodou a současně metodou FISH pro oblasti 13q14, 11q22-23, CEP12 a 17p13. Výsledky: Pro klasické cytogenetické vyšetření se stimulací podařilo získat metafázní buňky u 307 (83 %) z 369 pacientů. Chromozomové změny byly nalezeny u 243 (79 %) ze 307 hodnocených pacientů. Kromě aberací vyšetřovaných metodou FISH byly nalezeny další specifi cké změny v karyotypu např. del(6q), del(14q), t(14;18)(q32;q21), t(11;14)(q13;q32) a t(18;22) (q21;q11). U 103 (42 %) pacientů byly cytogenetickým vyšetřením nalezeny komplexní změny karyotypu, které metodou FISH detekovány nebyly. Závěr: Stimulace pomocí IL-2 a oligonukleotidu DSP30 účinně navozuje dělení maligních B-lymfocytů a umožňuje zachytit velké množství chromozomových změn u CLL, které by při vyšetřování metodou FISH pro základní čtyři aberace zůstaly skryty. Používání této metody v rutinní praxi se osvědčilo hlavně při identifi kaci pacientů s komplexními změnami karyotypu. Klíčová slova cytogenetika-chronická lymfocytární leukemie-interleukin-2-CpG-ODN DSP30-fl uorescenční in situ hybridizace-kultivace-chromozomální aberace Práce byla podpořena grantovými projekty IGA MZ ČR NT11218-6/2010 a NT13493-4/2012, projekty MŠMT OPVK SuPRe-MMe CZ.1.07/2.3.00/20.0045 a VaVPI CEITEC CZ.1.05/1.1.00/02.0068, Českou leukemickou skupinou pro život "CELL" a projektem (Ministerstva zdravotnictví) koncepčního rozvoje výzkumné organizace 65269705 (FN Brno). This study was supported by grants of Internal Grant agency of the Czech Ministry of Health No. NT11218-6/2010 and NT13493-4/2012, projects of Czech Ministry of Education OPVK SuPRe-MMe CZ.1.07/2.3.00/20.0045 and by VaVPI CEITEC CZ.1.05/1.1.00/02.0068, Czech leucemic group for life "CELL" and by project of the Czech Ministry of Health No. 65269705 (FN Brno). Autoři deklarují, že v souvislosti s předmětem studie nemají žádné komerční zájmy.

Comparison of Chromosomal Rearrangements in Bone Marrow Cells and Blast Transformed B-Cells in Relapse of B-Cell Chronic Lymphocytic Leukemia/ Small Lymphocytic Lymphoma

“…In PB B-cells, abnormalities ranked to a poor prognosis group by karyotyping results were reported in 6 cases (No. 1,2,10,11,13,14). The group attri buted to the favorable cytogenetical prognosis included 6 cases (No.…”

“…To improve the effectiveness of cytogenetic studies, the attempts were made to use other stimulators of the cell cycle. Among the new mitogens, the CpGoligodeoxynucleotide DSP30 (CpG-ODN) [10] is used. Thus, detection of chromosomal abnormalities increases to 80% of cases.…”

Efficacy of DSP30‐IL2/TPA for detection of cytogenetic abnormalities in chronic lymphocytic leukaemia/small lymphocytic lymphoma

“…showed a consistent and reproducible increase in detection rate of abnormal clones using CpG‐ODN as compared with traditional mitogens (pokeweek mitogen and TPA). Multiple other studies have shown an increase in detection rate of CLL to around 80% with CpG‐ODN The addition of the cytokine IL‐2 has also been shown to reduce apoptosis in replicating B cells and improve detection rate .…”