ResumenLos cítricos son huéspedes naturales de diferentes especies de viroides, todos pertenecientes a la familia Pospiviroidae. Estudios preliminares para detectar viroides en especies y variedades comerciales dieron resultados erráticos, excepto cuando se utilizaba la especie indicadora cidro Etrog como huésped bioamplificador. Para evitar el uso de este huésped en los ensayos de detección, se desarrolló un método basado en la hibridación northern. El protocolo desarrollado consistía en: (i) extracción de ácidos nucleicos de muestras de corteza recolectadas en diferentes épocas y/o almacenadas en distintas condiciones; (ii) separación de los RNAs en 5% PAGE o 1% agarosa y transferencia a membranas; (iii) hibridación con sondas de DNA marcadas con digoxigenina (DIG) específicas para cada viroide, detección con un anticuerpo anti-DIG conjugado con fosfatasa alcalina y revelado con un substrato quimioluminiscente (CSPD). Con este método se pueden detectar viroides en todas las especies de cítricos ensayadas. La técnica es extremadamente sensible, y acorta el tiempo necesario para la detección fiable de los viroides de cítricos conocidos hasta el momento.La aplicación de esta técnica ha permitido realizar prospecciones en árboles cultivados en distintas regiones citrícolas de Colombia, Perú y Brasil. En limas Tahití de Colombia se han identificado infecciones múltiples con HSVd y CDVd o con CEVd, HSVd y CDVd. Las muestras procedentes del Banco de Germoplasma de Palmira estaban libres de viroides, excepto una fuente de cidro Etrog que estaba infectada con CEVd y CDVd. La caracterización molecular de los aislados de HSVd, CDVd y CEVd recuperados de las muestras analizadas ha mostrado que: (i) todos los aislados de HSVd carecían del motivo de expresión de la caquexia, por lo que se trata de variantes no patogénicas, excepto uno que si contenía dicho dominio; (ii) los aislados de CDVd contenían variantes con alta identidad nucleotídica con la variante de referencia CVd-IIIb; (iii) uno de los aislados de CEVd (CEVd CO ) procedente de un cidro Etrog asintomático presentaba una identidad nucleotídica del 96,5% con la secuencia de referencia de la clase A (que engloba las variantes agresivas de este viroide) y del 98,9% con la secuencia de referencia V1 que induce síntomas muy agresivos en cidro Etrog. Los cambios nucleotídicos entre CEVd CO y la variante V1 son: U186A (dominio T R ), A235U (dominio V) y AU313-314GA(dominio P). Dada la probada implicación del dominio P en la patogénesis del CEVd, se han obtenido mutantes en las posiciones 313-314 de V1 y CEVd CO para poder demostrar si los cambios identificados en CEVd CO son efectivamente los responsables de que los cidros infectados con dicho aislado de CEVd no manifiesten síntomas.ii El análisis de clones de lima Tahití procedentes de Perú y Brasil que manifiestan el síndrome del "quebra-galho" (expresión que en portugués significa "rama quebradiza"), caracterizado por el agrietado de la corteza, enanismo y porte abierto de la copa, pero con características productivas...