Cloning, expression and purification of m-cell specific binding peptide (CO1) fused with GFP

Abstract

Despite many advantages over injection vaccines such as cost effectiveness, safety and easy to use, and so on, oral vaccines are negligibly concerned. This is mostly because of the availability of vast surface in the gastro-intestinal tract, thereby requiring lot of antigens which could hamper their potential. To circumvent this issue, a novel strategy for targeting antigens to M cells (microfold cells), a minority of cells located in the small intestine for antigen transportation, is utilized by making a fusion protein comprised of an antigen with an M cell specific ligand. Discovered via biopanning, Co1 peptide is a potential ligand because of its small size (12 amino acids) and having an adjuvant capacity. To develop a monitoring model, we fused GFP (green fluorescent protein) as a monitoring marker with Co1 peptide. Initially, co1-gfp fusion gene was created by overlap extension PCR on GFP-encoded vector backbone, then it was incorporated into an expression vector pET22b before transforming into E. coli DH5α. The recombinant vector was screened by PCR method, sequenced and aligned with designed sequences. The in-frame vector was then introduced into E. coli BL21(DE3) for expression by inducing with 0.5mM IPTG. Fusion protein was purified using Ni-affinity chromatography. The results showed that the fused genes were in-frame cloned and completely matched with the designed sequences. SDS-PAGE and Western blot analyses showed Co1-GFP protein expressed in soluble form and could be purified at one-step elution of 500mM imidazole. The purified fusion protein could emit fluorescent light under UV excitation. Collectively, recombinant Co1-GFP fusion protein was successfully produced and its potential applications need to be warranted.

M cell: intestinal immunity’s gateway

“…Một peptide khác cũng được xác nhận là có liên kết với C5aR giống như OmpH là Co1 bằng phương pháp sàng lọc phage display 59 . Protein dung hợp Co1 và kháng nguyên mô hình GFP đã được biểu hiện, tinh sạch thành công, là bước đầu trong việc nghiên cứu và phát triển vaccine uống sử dụng Co1 là phối tử dẫn đường để nhắm trúng đích tế bào M 73 .…”

Cloning, expression, purification and interaction evaluation of 30 amino acids in C terminus of Clostridium perfringens toxin with its receptor Claudin-4

“…Hiện nay, các nhóm nghiên cứu đang cố gắng tìm kiếm và lựa chọn các phối tử phù hợp với chiến lược phát triển vaccine của mình, trong đó nổi bật nhất là các phối tử có bản chất là peptide và protein. Các phối tử có bản chất là protein và peptide gồm có FimH [5], Hsp60 [6], Co1 [7] hay vùng độc tố đầu C của Clostridium perfringens (CPE) đều là những phối tử đang được quan tâm hiện nay. Nhiều nghiên cứu đã chỉ ra rằng, 30 amino acid ở vùng đầu C trên độc tố của loài Clostridium perfringens (CPE30) có khả năng bám ái lực cao với thụ thể Claudin-4 hiện diện trên bề mặt tế bào M và hoàn toàn không gây độc cho cơ thể [8][9][10].…”