Comparison of 9 Methods for the Determination of Cholesterol

Haeckel, Rainer; Sonntag, Oswald; Külpmann, W. -R.; Feldmann, Ursula

doi:10.1515/cclm.1979.17.8.553

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“…Recently it was demonstrated that the enzymatic reactions for the determination of cholesterol concentrations proceed via more complicated pathways than was previously expected (11,13,(16)(17)(18)(19).…”

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“…The cholesterol concentrations obtained with the enzymatic method are usually lower than those obtained by the Liebermann-Burchard method (5,7,11,13). This was explained by the higher specificity of the enzymatic methods.…”

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“…Very recently Haeckel (11) assumed that-differences between the analytical values of cholesterol determinations from commercial control material might be a result of the various esterase sources.…”

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Incomplete Hydrolysis of Cholesteryl Esters during the Enzymatic Cholesterol Determination as Evidenced by Aqueous Cholesteryl Ester Solutions: Comparison of Six Enzymatic Procedures with the Liebermann-Burchard Method

Tel¹,

Berends²

1980

Clinical Chemistry and Laboratory Medicine

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Aqueous solutions of cholesterol and some cholesteryl esters were prepared. The hydrolysis of cholesteryl esters with enzymatic methods could therefore be studied in some detail.The total cholesterol concentration of the aqueous cholesterol and cholesteryl ester solutions was determined by 6 different enzymatic procedures as well as the Liebermann-Burchard method.For some esters (acetate and arachidonate esters) the esterase reaction is not complete within the usual reaction time, whereas most other esters gave analytical results lower than the theoretical. With the Liebermann-Burchard method all esters reacted completely within the reaction time.The esterases have very different specificities for the various cholesteiyl esters.With the enzymatic method several commercial control sera as well as human sera gave lower cholesterol concentrations than the Liebermann-Burchard method. These differences can be explained mainly by this incomplete hydrolysis.Some practical recommendations are given. Unvollständige Hydrolyse von Cholesterinestern bei der enzymätischen Cholesterinbestimmung in wäßrigen Lösungen von Cholesterinestern: Vergleich von sechs enzymätischen Verfahren mit der Liebermann-Burchard-MethodeZusammenfassung: Wäßrige Lösungen von Cholesterin und einigen Cholesterinestern wurden hergestellt; daran konnte die Hydrolyse von Cholesterinestern mit enzymätischen Methoden in einigen Einzelheiten untersucht werden.Die Cholesterin-Gesamtkonzentration der wäßrigen Cholesterin-und Cholesterinester-Lösungen wurde mit sechs verschiedenen enzymätischen Verfahren sowie mit der Liebermann-Burchard-Meihode bestimmt.Für einige Ester (Acetat-, Arachidonat-) ist die Esterasereaktion innerhalb der üblichen Reaktionszeit nicht vollständig, während die meisten anderen Ester niedrigere Analysenresultate als theoretisch erwartet ergaben. Mit der LiebermannBurchardMeüaode reagieren die Ester innerhalb der Reaktionszeit vollständig. Die Esterasen haben sehr unterschiedliche Spezifitäten für die verschiedenen Cholesterinester.Mit der enzymätischen Methode ergaben mehrere käufliche Kontrollseren als auch Serum vom Menschen niedrigere Cholesterinkonzentrationen als die Liebermann-Burchard-Methode. Diese Differenzen können im wesentlichen durch unvollständige Hydrolyse erklärt werden.Einige praktische Hinweise werden gegeben.

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Incomplete Hydrolysis of Cholesteryl Esters during the Enzymatic Cholesterol Determination as Evidenced by Aqueous Cholesteryl Ester Solutions: Comparison of Six Enzymatic Procedures with the Liebermann-Burchard Method

Tel¹,

Berends²

1980

Clinical Chemistry and Laboratory Medicine

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“…aber neben dem unangenehmen Umgang mit den sehr *"eungen zu überprüfen. aggressiven Reagenzien haftet der Methode der Nachteil der Bei diesem neu entwickelten Test (9) (10,11). Die Medikamente wurden jeweils in hoher Dosierung (i.a.…”

Section: Introductionunclassified

Die Bestimmung der Gesamtcholesterin-konzentration im Serum an einem kinetisch messenden Analysengerät (ACP 5040)

Seiler¹,

Nagel²

1983

LaboratoriumsMedizin

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ZusammenfassungD ie kinetische Bestimmung des Cholesterins im Serum am AC P 5040 wurde unter Routinebedingungen überprüft. Präzision und Wiederfindung sind gut, die Bestimmung ist bis mindestens 1000 mg l dl linear und korreliert gut mit der CHOD-PAP Endpunktmessung. Hämoglobin und BHirubin stören die Reaktion nicht. Therapeutische Dosen von Ascorbinsäure und Noramidopyrin haben nur einen geringen Einfluß auf das Ergebnis. u-Methyldopa führt zu erniedrigten Werten. Schlüsselwörter: Cholesterinbestimmung -kinetische Methode -Automation Summary: The kinetic determination of cholesterol in serum with the analyzer AC P 5040 was tested under routine conditions. Precision and accuracy is good. The determination is linear at feast up to a concentration of WOOmgldl. It correlates well with the CHOD-PAP endpoint method. Hemoglobin andbilirubin do not interfere. A slight interference is found with ascorbic acid and noramidopyrine under therapeutic conditions. cn-Methyldopa leads to diminished values. Einleitung. mit Katalase (5), Peroxidase (6), mit Hilfe der Jod-JodidReaktion (7) oder mit ionenselektiven Elektroden (8) nachDie Messung der Konzentration des Gesamtcholesterins im gewiesen werden.

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“…Eine mögliche Störung durch Arzneimittel wurde für die sog. Dies führt nach den Untersuchungen von Haeckel et al(16) jedoch nicht zu einer höheren Arzneimittelinterferenz. Bei Übertragung dieser Ergebnisse auf das hier beschriebene Verfahren muß die geringere Spezifität der Peroxidäse-Methode beachtet werden.…”

unclassified

Vorläufig ausgewählte Methode

1983

CCLM

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Zusammenfassung: Es wird eine Methode für die enzymatische Bestimmung des Gesamt-Cholesterins im Serum beschrieben: Herstellung der Lösungen aus käuflichen Reagentien und Enzymen, manuelle Testdurchführung, Photometrie des gebildeten, stabilen Farbstoffs im Bereich von = 500-550 nm und Berechnung über einen mitgeführten Cholesterinstandard oder mit einem konstanten Faktor. Es werden die Gütekriterien der Methode mitgeteilt: Die Unpräzision anhand eines Ringversuchs in 3 Laboratorien, die Richtigkeit anhand eines Methodenvergleichs mit einer "Definitiven Methode" bzw. einer "Referenzmethode". Auf Störfaktoren und Einflüßgrößen bei der eiizyinatischen Cholesterin-Bestimmung sowie auf einschlägige Untersuchungen zum Problem der Referenzbeieiche wird abschließend eingegangen. Candidate Selected Method for the enzymatic determination of total cholesterol in serumSummary: An enzymatic method is described for the determination of total cholesterol in serum using a single aqueous reagent which can easily be prepared from commertial Substrates and enzymes. The determination is carried out manually, the resulting stable chromogen is measured at a wavelength of 500-550 nm. The cholesterol concentration may be calculated either using a primary cholesterol Standard or a constant factor for a given wavelength. Thie reliability of the method is reported: Data for the imprecision are given on the basis of a survey in 3 laboratories, the accuracy is established by comparison with a definitive and a reference method. Analytical and biological interferences are briefly discussed and results with this enzymatic method are reported concerning the reference values for serum cholesterol. EinführungDie Bestimmung von Cholesterin im Serum besitzt erhebliche praktische Bedeutung für die Erkennung 1 ) Ausgearbeitet, beraten und geprüft von der Arbeitsgruppe Lipide und Lipoproteine in der Standardisierungskommission der Deutschen Gesellschaft für Klinische Chemie e.V. auf der Grundlage eines Editorials der Standardisierungskommission: und Therapiekontrolle primärer und sekundärer Hyperlipidämien. Die in zahllosen Modifikationen beschriebenen chemischen Bestimmungsmethoden werden seit einigen Jahren zunehmend zugunsten der enzymatischen Verfahren verlassen. Diese beruhen auf einer Spaltung der im Serum vorkommenden Cholesterin-Fettsäureester durch bakterielle Cholesterinesterase mit nachfolgender Oxidation Brought to you by | University of Arizona Authenticated Download Date | 6/1/15 12:36 PM

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Comparison of 9 Methods for the Determination of Cholesterol

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Incomplete Hydrolysis of Cholesteryl Esters during the Enzymatic Cholesterol Determination as Evidenced by Aqueous Cholesteryl Ester Solutions: Comparison of Six Enzymatic Procedures with the Liebermann-Burchard Method

Incomplete Hydrolysis of Cholesteryl Esters during the Enzymatic Cholesterol Determination as Evidenced by Aqueous Cholesteryl Ester Solutions: Comparison of Six Enzymatic Procedures with the Liebermann-Burchard Method

Die Bestimmung der Gesamtcholesterin-konzentration im Serum an einem kinetisch messenden Analysengerät (ACP 5040)

Vorläufig ausgewählte Methode

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