RÉSUMÉ
Matériel et méthode
RéactifsLe methanol, l'acétone, le dichlorométhane et le chloroforme sont de qualité HPLC (Prolabo), l'acétonitrile, l'isopropanol, l'acide formique, le formiate d'ammonium, l'ammoniaque (30 %), le chlorure d'ammonium, l'acide chlorhydrique 0.5N et la soude IN sont de qualité pour analyse (Carlo Erba). L'extraction liquideliquide utilise une solution tampon de NH4C1 saturée ajustée à pH 9,5 par l'ammoniaque. Le tampon formiate d'ammonium 2mM ajusté à pH 3 par l'acide formique est utilisé pour la séparation chromatographique des alcaloïdes de pK < 6,5. Le tampon formiate 10 mM ajusté à pH 8,2 par l'ammoniaque est utilisé pour la séparation des alcaloïdes de pK > 6,5.Les solutions standard d'alcaloïdes sont réalisées à 10, 1 et 0,1 ug/ml dans le methanol à partir d'étalons disponibles chez Extrasynthèse (Genay, France) ou Sigma (Saint Quentin Fallavier, France).
ExtractionLes alcaloïdes ont été divisés en deux groupes selon leurs propriétés physico-chimiques. Les alcaloïdes
Séparation chromatographiqueLes séparations chromatographiques sont réalisées sur colonne C18-ODS -150 x 2 mm-5um (InterchimUptisphère) munie d'une pré-colonne de 10 mm possé-dant les mêmes caractéristiques.Les alcaloïdes du groupe A, de pK supérieur à 6,5, peu hydroxylés et de "faible" poids moléculaire sont séparés dans des conditions basiques à pH 8,2 avec un gradient de
RésultatsLes limites de détection obtenues applicables à la réso-lution de cas médicaux légaux sont présentés dans le tableau II. La répétabilité était satisfaisante avec un coefficient de variation inférieur à 16,2 %. La reproductibilité sur l'ensemble des alcaloïdes (n=10) à 100 ng/ml montrait un coefficient de variation inférieur à 11,2 % (excepté pour la lobéline = 16,2 %), à 10 ng/ml un coefficient de variation inférieur à 16,0 % (excepté pour la lobéline = 21.8 %), à 1 ng/ml un coefficient de variation inférieur à 19,0 % (tableau III). Les rendements d'extraction sont indiqués dans le tableau IV (7). d'un extrait de sang total. Pics : la et lb = atropine (m/z 290,3 et 124,2), 2a et 2b = scopolamine (m/z 304,3 et 156,2). figure 3) et le contenu gastrique à des taux non mortels, cependant l'effet narcotique du Datura (hallucinogène narcotique incapacitant) les avait probablement laissées dans un état de stupeur semi-comateux pouvant expliquer leur incapacité de fuir (8,9). Les parents ont finalement avoué avoir drogué leurs enfants avec des extraits de feuilles de Datura, fréquente dans cette région, puis les avoir tuées par le feu après que leur requête d'admission de celles-ci dans une institution spécialisée fut refusée. carboxyhémoglobine (HbCO) = 11,3 % acide valproique = 14,4 ug/ml clonazepam = 0,9 ug/ml cyanure = 2,4 ug/ml atropine = 32,5 ng/ml scopolamine = 4,4 ng/ml sang HbCO= 11,9 % acide valproique = 8,3 ug/ml carbamazépine =1,9 ug/ml cyanure = 0,7 ug/ml atropine = 7,5 ng/ml scopolamine = 0,8 ng/ml 1. contenu