Mesmo considerando os avanços nos estudos de micropropagação em Hevea spp., a compreensão dos estímulos e condições necessárias para o estabelecimento do cultivo in vitro ainda são limitadas. Uma das razões para isto acontecer é devido à falta de um protocolo eficiente para a propagação de clones elites de seringueira em larga escala. Neste sentido, investigamos o efeito do ácido 2,4-diclorofenoxiacético na indução de calos em segmentos foliares de Hevea spp., bem como o uso do PPM® (Plant Preservative Mixture) na inibição de contaminações. Folhas juvenis de seringueira foram inoculadas em meio de cultura MS (Murashig Skoog) suplementado com 2,4-D (0; 0,25; 0,5; 1,0; 2,0 e 4,0 mg L-1) com biocida PPM® (0 e 1,0 mL L-1). Após 60 dias foi possível observar maior porcentagem de sobrevivência e expressiva oxidação fenólica na presença do PPM®. As concentrações de 2,4-D (2,0 e 4,0 mg L-1) combinadas com PPM® (1 mL L-1) foram eficientes na inibição de contaminações microbianas. A indução de calo ocorreu no tratamento contendo 1 mg L-1 de 2,4-D e 1 mL L-1 de PPM® e formou um calo compacto com coloração branca. O protocolo utilizado neste trabalho foi eficiente para desinfestação dos explantes foliares de Hevea spp.