Criopreservación de Espermatozoides Caninos a - 80C

Abstract

RESUMEN. La congelación y almacenamiento en nitrógeno líquido (N 2 L) es la técnica más utilizada para preservar el semen de canino y de otras especies domésticas durante largos períodos de tiempo. Este estudio fue diseñado para validar el uso del ultracongelador de -80ºC para congelar y almacenar semen canino en pajuelas. Tres protocolos fueron ensayados (n=10): Control: semen congelado y almacenado en N 2 L; Exp. 1: semen congelado y almacenado -80ºC, y Exp.2: semen congelado a -80ºC y almacenado en N 2 L. Postdescongelación se evaluó por citometría de flujo la viabilidad e integridad de membrana plasmática (SYBR-14/PI), potencial de membrana mitocondrial (∆Ψm; JC-1), integridad de la membrana del acrosoma (PSA/FITC-PI), translocación de fosfatidilserina (Annexin-V-FITC/PI) y fragmentación del ADN (TUNEL). No se observaron diferencias significativas (P<0,05) entre los grupos Control, Exp.1 y Exp.2 respecto a: integridad de membrana plasmática intacta (42,2 ± 5,3; 35,57 ± 10,3 y 40,76 ± 12,1; respectivamente), ∆Ψm normal (54,7 ± 20,6; 44,4 ± 15,8 y 43,4 ± 15,3 respectivamente), membrana acrosomal intacta (42,9 ± 11,1; 53,2 ± 15,8 y 48,7 ± 20,1 respectivamente) y ADN fragmentado (0,87 ± 0,41; 0,75 ± 0,16; 0,79 ± 0,27 respectivamente). Sin embargo, el promedio de la motilidad progresiva postdescongelación de los grupos E1 y E2 (37,0 ± 4,4%; 36,8 ± 4,1% respectivamente) demostraron diferencias (P<0,05) respecto al grupo Control (55,9 ± 8,7%). Los resultados obtenidos en el presente estudio demostraron que la utilización del ultracongelador de -80ºC para congelar y almacenar espermatozoides caninos tiene un uso potencial en medicina veterinaria como alternativa a la utilización del N 2 L. PALABRAS CLAVE: Canino; Espermatozoide; Congelación; Ultracongelador de -80ºC. INTRODUCCIÓNEn caninos, la congelación y conservación de espermatozoides por periodos prolongados de tiempo se realiza en nitrógeno líquido (N 2 L) (Alamo et al., 2005). Además, han sido utilizadas técnicas alternativas para el procedimiento de congelación como el hielo seco y ultra-congeladores programables para conservar muestras de semen, sin embargo el almacenamiento es en N 2 L (Olar et al., 1989;Hay et al., 1997;Thomas et al., 1993).Ha sido determinada la función espermática en ultracongeladores de -152ºC utilizando parámetros como la motilidad, reacción del acrosoma y morfoanomalías (Ála-mo et al.;Batista et al., 2006). Sin embargo, no existen antecedentes de la utilización del ultracongelador de -80ºC, para congelar semen canino en pajuelas convencionales por periodos cortos como alternativa a la técnica convencional de congelación en N 2 L. En este estudio se evalúa el efecto de la temperatura de congelación y almacenamiento a -80ºC, en comparación al método convencional de congelación y almacenamiento en N 2 L, sobre parámetros esenciales de la función del espermatozoide de canino, tales como motilidad progresiva, funcionalidad de membranas (plasmática, acrosomal y mitocondrial) y fragmentación del ADN. MATERIAL Y MÉTODOAnimales. Se utilizaron...

Caracterización básica y funcional del semen del Perro sin Pelo del Perú

“…Este parámetro es un indicador del estado de funcionalidad de las mitocondrias. Existe una relación entre la motilidad y el estado mitocondrial, ya que las mitocondrias son las productoras de ATP, producidas por la fosforilación oxidativa, lo cual es importante para que pueda ocurrir una correcta actividad celular como la motilidad (Salinas et al, 2013).…”