Critical Steps in the Production of Polyclonal and Monoclonal Antibodies: Evaluation and Recommendations

Abstract

Antibodies are valuable tools in the laboratory and clinic. Antibodies include those secreted by a single clone of B lymphocytes, termed monoclonal antibodies, and those produced by a mixture of various B lymphocyte clones, termed polyclonal antibodies. Both products have become essential instruments in fundamental immunological research, immunohistochemistry, diagnostic testing, and vaccine quality control. Antibody production requires a substantial number of animals, and the animals are subjected to a number of invasive procedures such as antigen injection and blood collection. However, by carefully designing an immunization protocol and by optimizing the immunization response, it is possible to minimize animals' pain and distress while obtaining optimal immune responses. In this article, the critical steps in the production of polyclonal and monoclonal antibodies are described, specifically including selection of the animal species and its age, injection protocol, and ascites tapping. Recommendations are provided for optimizing the immunization response.

Generation and purification of monoclonal antibodies against Der f 2, a major allergen from <i>Dermatophagoides farinae </i>

“…BALB/c mice are most commonly used for ascites production because this strain of animals is syngeneic with the myeloma cells that are most frequently used for fusion (20). Mice were first given a priming agent by i.p.…”

Razvoj metoda imunohistokemijskog bojenja i optimizacija protokola za detekciju transkripcijskog faktora BACH2

“…Monoklonalna antitijela moguće je proizvesti u velikim količinama jer se proizvode kao stanične linije iz hibridoma stanica koje su nastale fuzijom limfocita iz slezene imunizirane životinje s tumorskim stanicama mijeloma i najčešće su visokospecifična za određeni epitop. I monoklonalna antitijela mogu stvarati nepouzdane rezultate koje je teško interpretirati ako nisu visokospecifična i ako je ciljani epitop prisutan u malim količinama 8 . kojem je tkivo izloženo fiksativu.…”

Produção de hibridomas secretores de anticorpos anti-Neospora caninum para uso em imunodiagnóstico

“…Uma das provas diagnósticas mais utilizadas para a neosporose fundamenta-se em ensaios imunoenzimáticos (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay/ELISA), que têm sido amplamente utilizados na confirmação das infecções em rebanhos bovinos devido à sua rapidez e facilidade para a análise dos resultados 9 . Conforme indicado por Lenaars e Hendriksen 10 , anticorpos têm sido amplamente utilizados para detecção e caracterização imunoquímica de diversos componentes celulares, assim como em testes imunodiagnósticos e na identificação de patógenos relacionados com doenças humanas e animais, entre outros usos. Nesse contexto, produção de células híbridas imortalizadas em culturas de tecido e produtoras de anticorpos com especificidade pré-determinada pelo processo de sua preparação, conhecido como hibridomas secretores de anticorpos, são de grande interesse biotecnológico 10 .…”

“…Conforme indicado por Lenaars e Hendriksen 10 , anticorpos têm sido amplamente utilizados para detecção e caracterização imunoquímica de diversos componentes celulares, assim como em testes imunodiagnósticos e na identificação de patógenos relacionados com doenças humanas e animais, entre outros usos. Nesse contexto, produção de células híbridas imortalizadas em culturas de tecido e produtoras de anticorpos com especificidade pré-determinada pelo processo de sua preparação, conhecido como hibridomas secretores de anticorpos, são de grande interesse biotecnológico 10 . A produção de anticorpos monoclonais para a caracterização de componentes moleculares antigênicos de N. caninum envolvidos no processo de invasão celular é importante para o desenvolvimento tanto de ferramentas de diagnóstico como para o controle da infecção nos hospedeiros.…”