Cryopreservation-induced alterations in protein tyrosine phosphorylation of spermatozoa from different portions of the boar ejaculate

Kumaresan, A.; Siqueira, Amanda Pimenta; Hossain, Mahboob; Bergqvist, Ann-Sofi

doi:10.1016/j.cryobiol.2011.08.002

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“…A similar finding has been reported in the stallion [34]. In the boar, an increase in the M540-YP stainability has been reported as early as 100 seconds after exposure to bicarbonate [5].…”

Section: Discussionsupporting

confidence: 86%

“…Merocyanine 540 (M540) detects bicarbonate-induced changes in lipid packaging and distribution within the sperm plasma membrane [34], which are thought to be very early changes in the capacitation process [5]. As membrane fluidity increases, more M540 is able to intercalate into the membrane, thereby acting as a useful marker for membrane destabilization [5,11,[35][36][37][38][39].…”

Section: Introductionmentioning

confidence: 99%

“…Anti-phospho-tyrosine antibodies can be used to immune-fluorescently detect phosphorylation of tyrosine residues in the tail of capacitated sperm [6,7,[24][25][26][27][28][29][30][31][32][33][34].…”

Section: Introductionmentioning

confidence: 99%

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Validation of merocyanine 540 staining as a technique for assessing capacitation-related membrane destabilization of fresh dog sperm

Steckler¹,

Stout

Durandt

et al. 2015

Theriogenology

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The aim of this study was to determine whether flow cytometric evaluation of combined merocyanine 540 and Yo-Pro 1 staining (M540-YP) would identify viable dog sperm that had undergone membrane stabilization known to be associated with capacitation in other species, and whether such destabilization is detected earlier than when using the tyrosine phosphorylation and ethidium homodimer stain combination (TP-EH) with epifluorescence microscopy. Semen from nine dogs was collected and incubated in parallel in bicarbonate-free modified Tyrode"s medium (-BIC), in medium containing 15 mM bicarbonate (+BIC), in dog prostatic fluid (PF), and in phosphate buffered saline (PBS). Aliquots for staining were removed at various time points during incubation of up to 6 hours. Staining with M540-YP allowed the classification of dog sperm as viable without destabilized membranes, viable with 2 destabilized membranes, non-viable without destabilized membranes or non-viable with destabilized membranes. The percentage of viable sperm detected using EH (83.5 ± 1.37%; mean ± SEM) was higher than when using YP (66.7 ± 1.37%: P < 0.05; n=54 semen samples). On the other hand, M540-YP identified a higher percentage of viable sperm with destabilized membranes than TP-EH (75 ± 1.76% vs. capacitation was recorded during incubation in PBS. We conclude that YP identifies sperm committed to cell death earlier than EH, and that the M540-YP stain combination identifies membrane destabilization known to be associated with capacitation in other species earlier than the TP-EH stain combination.

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“…A similar finding has been reported in the stallion [34]. In the boar, an increase in the M540-YP stainability has been reported as early as 100 seconds after exposure to bicarbonate [5].…”

Section: Discussionsupporting

confidence: 86%

Section: Introductionmentioning

confidence: 99%

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Validation of merocyanine 540 staining as a technique for assessing capacitation-related membrane destabilization of fresh dog sperm

Steckler¹,

Stout

Durandt

et al. 2015

Theriogenology

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“…Yet, capacitation‐like changes (cryocapacitation) occur in spermatozoa subjected to cooling and/or cryopreservation, and these changes are similar to true capacitation (Bailey et al, 2000; Green and Watson, 2001). A substantial proportion of boar spermatozoa may undergo protein tyrosine phosphorylation during the cryopreservation process (Kumaresan et al, 2011, 2012a,b). Recently, Harayama et al (2010) also reported a relationship between the level of tyrosine phosphorylation in frozen‐thawed semen and tolerance to frozen storage in bulls.…”

Section: Introductionmentioning

confidence: 99%

Oviductal fluid modulates the dynamics of tyrosine phosphorylation in cryopreserved boar spermatozoa during capacitation

Kumaresan

Johannisson

Humblot

et al. 2012

Molecular Reproduction Devel

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Following insemination, spermatozoa are retained in the utero-tubal junction and isthmic region of the oviduct, where essential steps of capacitation are coordinated. Although a majority of the spermatozoa is exposed to similar conditions in the oviduct, the speed of the response varies depending on the individual male and the state of the spermatozoa. The present study evaluated individual boar variations in terms of the ability of spermatozoa to undergo tyrosine phosphorylation in response to isthmic oviductal fluid (ODF). Cryopreserved spermatozoa from four boars were incubated with pre- and post-ovulatory ODF for 6 hr. Sperm kinematics, global protein tyrosine phosphorylation, and dynamics of different phosphorylation patterns were analyzed at hourly interval. The percentage of phosphorylated spermatozoa in the pre-ovulatory ODF-treated group was significantly (P < 0.001) higher than in the other treatment groups. Motility, velocity, and protein tyrosine phosphorylation in spermatozoa in response to ODF and control media also showed differences between boars. Spermatozoa from all four boars showed strong expression of a 19-kDa phosphoprotein while spermatozoa from two boars showed additionally strong expression of a 32-kDa phosphoprotein when incubated with pre-ovulatory ODF. While phosphorylation of proteins in the acrosome and the equatorial segment of the sperm were noticed at an early stage during incubation with ODF, tail phosphorylation appeared at a later stage of capacitation. The results indicate individual variation between boars in terms of sperm proteins, including different phosphorylation patterns, in response to ODF, which might be related to fertility.

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“…O colesterol tem múltiplos efeitos sobre as membranas plasmática e acrossomal, incluindo estabilização, redução da permeabilidade, o que melhora as características morfológicas de membrana permitindo interações célula-célula, que influencia a transição de fase da membrana, proporcionando microambientes adequados (química e/ou física) para proteínas associadas, e servindo como um antioxidante (CROCKETT 1998). Também é relatado que o processo de criopreservação pode levar à criocapacitação do sêmen equino (ANDRADE et al, 2012), suíno (KUMARESAN et al, 2011), bubalino (KADIRVEL et al, 2009KUMAR et al, 2014) e ovino (GILLAN et al, 1997;ROVEGNO, et al, 2013 A teoria de formação de cristais de gelo intracelular é, no entanto, controversa e contradita em diversos estudos, os quais não os observaram em espermatozoides bovinos (RAPATZ et al, 1966), suínos HERNANDEZ et al, 2007), equinos (MORRIS et al, 2007) e humanos (MORRIS, 2006) Com isso, observa-se que o processo de congelação, apesar de importante para a utilização do sêmen em protocolos de inseminação artificial, possui pontos negativos para a célula. É notório que esse processo leva a diminuição de parâmetros espermáticos como a motilidade, atividade respiratória, estado das membranas e qualidade do DNA (GILLAN et al, 2004).…”

Section: Introductionunclassified

Criopreservação do sêmen ovino com incorporação de colesterol por ciclodextrina

Batissaco¹

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AgradecimentosÁ Deus, por sempre ter iluminado meu caminho, me orientado, me acalmado nas horas de desespero e por sempre me mostrar que o caminho que ele me planejou, por mais difícil que seja sempre valerá a pena se for trilhado com amor e ao lado daqueles que se ama; Á minha mãe, Maristela, por ter criado mais que um filho, ter criado a o homem que sou hoje, devo tudo a você, todos os ensinamentos, todas as conversas, as broncas, o amor que você dedicou a mim por todos esses anos, sou muito sortudo de ter você como mãe, como base, como amiga, obrigado, por tudo, te amo; Á meu pai, Alderico, por ser hoje e sempre meu herói, meu exemplo de vida, meu amigo, por ter me ensinado o valor da vida, a sempre buscar minha felicidade, e sempre fazer de tudo, mesmo fora do alcance, para me ajudar a conquistar tudo na vida, sou muito grato por tudo desde as broncas até as conversas sobre a vida, muito obrigado, te amo; Á minha irmã, Marina, por ter sido sempre minha companheira desde as brigas de irmão que acabavam em risadas, até os conselhos, as brincadeiras, o companheirismo, as felicidades divididas, você é sempre vai ser minha melhor amiga, muito obrigado, te amo; Á meu avô (in memoriam), Francisco, que mesmo sem saber, sempre me incentivou a fazer veterinária, sempre me envolveu com suas histórias da fazenda, sempre me ensinou o carinho pelos animais e sempre me sorriu com um sorriso orgulhoso, gostaria que você estivesse entre nós para poder dividir essa realização com você; Á Profa. Dra. Eneiva Carla Carvalho Celeghini, minha orientadora, praticamente desde a época da graduação, que sempre me guiou, me mostrou o caminho da ciência e sempre dispertou meu interesse na veterinária, você não só me ajudou muito academicamente, mas também sempre me orientou na minha vida pessoal, me incentivou e motivou a sempre dar o melhor de mim, sempre irei admirar a sua curiosidade científica, sua ética e a empolgação com que você sempre vê a ciência, obrigado por ter aberto as portas para mim, por acreditar em mim e pela sua amizade, sou eternamente grato a você; Ao Prof. Dr. Rubens Paes de Arruda, muito obrigado pelos conselhos, pelas risadas no corredor, pela ajuda com os animais no começo e por abrir as portas do Laboratório de Biotecnologia do Sêmen e Andrologia (LBSA) para a realização de nossas analises; Ao Prof. Dr. André Furugen Cesar de Andrade, obrigado pelos conselhos, pelas dicas no experimento, pelas risadas, por sempre ensinar a buscar mais, a pensar a frente, por ceder suas orientadas para me ajudar no experimento e por ter aberto as portas do Aos funcionários do CBRA, Clayton, João, Márcio, Rildo (Negão), Zé Maria, Alexandra e Sandra, pela convivência, pela ajuda sempre com um sorriso no rosto e pela amizade; Às funcionárias do VRA (SP), Harumi, Roberta e Thais por sempre ajudarem tão prontamente e com tanto carinho um pobre pós graduando que sempre precisava das coisas urgentemente e principalmente pela amizade;As pessoas que atuaram ativamente em meu experimento; Doci e Mari, que suportaram varias sessões de cole...

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Cryopreservation-induced alterations in protein tyrosine phosphorylation of spermatozoa from different portions of the boar ejaculate

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Validation of merocyanine 540 staining as a technique for assessing capacitation-related membrane destabilization of fresh dog sperm

Validation of merocyanine 540 staining as a technique for assessing capacitation-related membrane destabilization of fresh dog sperm

Oviductal fluid modulates the dynamics of tyrosine phosphorylation in cryopreserved boar spermatozoa during capacitation

Criopreservação do sêmen ovino com incorporação de colesterol por ciclodextrina

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