Cryopreservation of Cord Blood Nucleated Cells Using Non-Penetrating Cryoprotectant PEO-1500

Abstract

Реферат: Разработка безотмывочных методов криоконсервирования фракции ядросодержащих клеток кордовой крови, в состав которой входит популяция гемопоэтических стволовых клеток-предшественников, является актуальной задачей для их долгосрочного хранения. В работе использована технология криоконсервирования ядросодержащих клеток кордовой крови, включающая выделение популяции клеток оригинальным методом двухэтапного центрифугирования, обработку непроникающим криопротектором полиэтиленоксидом с м. м. 1500 (ПЭО-1500) и замораживание по двухэтапной программе. Установлено, что данная технология позволяет сохранить более 72% CD45 + -и 75% CD34 + -клеток с показателями жизнеспособности более 83 и 91% соответственно. При этом повышенное содержание активных форм кислорода (в (42,7 ± 6,3)% клеток) на фоне высоких показателей количества клеток и их жизнеспособности может рассматриваться как физиологичный ответ клеток на воздействие факторов криоконсервирования.Ключевые слова: гемопоэтические стволовые клетки, ядросодержащие клетки, кордовая кровь, криоконсервирование, непроникающий криопротектор, ПЭО-1500.Реферат: Розробка безвідмивних методів кріоконсервування фракції ядровмісних клітин кордової крові, до складу якої входить популяція гемопоетичних стовбурових клітин-попередників, є актуальним завданням для їх довгострокового зберігання. У роботі використовується технологія кріоконсервування ядровмісних клітин кордової крові, яка включає виділення популяції клітин оригінальним методом двоетапного центрифугування, обробку непроникаючим кріопротектором поліетиленоксидом із м. м. 1500 (ПЕО-1500) і заморожування за двоетапною програмою. Встановлено, що представлена технологія дозволяє зберегти більше 72% CD45 + -та 75% CD34 + -клітин із показниками життєздатності більше 83 і 91% відповідно. При цьому підвищений вміст активних форм кисню (в (42,7 ± 6,3)% клітин) при високих показниках кількості клітин та їх життєздатності може розглядатися як фізіологічна відповідь клітин на вплив факторів кріоконсервування.Ключові слова: гемопоетичні стовбурові клітини, ядровмісні клітини, кордова кров, кріоконсервування, непроникаючий кріопротектор, ПЕО-1500.Abstract: Development of wash-free cryopreservation methods for cord blood nucleated cell fraction, including the population of hematopoietic stem/progenitor cells, is an actual task for their long-term storage. Present investigation involved the technique of cord blood nucleated cells cryopreservation, comprising the isolation of cell population by the original two-step centrifugation method, the treatment with non-penetrating cryoprotectant polyethylene oxide with molecular weight of 1500 (PEO-1500) and freezing by the two-step program. This technique enabled to preserve more than 72% CD45 + and 75% CD34 + cells with the viability indices of correspondingly 83 and 91% and higher. Herewith, an increased content of reactive oxygen species (42.7 ± 6.3%) on the background of high cell number and their viability may be considered as a cells' physiological response to the effect of cryopreservat...

Umbilical cord blood stem cells: clinical application of allogeneic material, problems and perspectives of banking

“…Мета роботи -створення певних температурно-осмотичних умов, необхідних для стабілізації плазматичних мембран і білків цитоскелета клітини на всіх етапах технологічного процесу [7].…”

“…Alternative cryoprotective agents include ethylene glycol, 1,2-propylene glycol, polyethylene oxide (PEO-1500, PEO-400), PVP, hydroxycellulose, disaccharides (sucrose, maltose, trehalose), as well as macromolecules of dextran, hydroxyethyl starch, etc. They are used as basic CPAs and in combination with low doses of DMSO [7,24,43,94,118]. Thus, over the past two decades, much attention has been paid to a disaccharide such as trehalose, due to its unique properties to promote the formation of vitreous ice, as well as maintaining thermodynamic stability of cell membranes, ability to inhibit lipid phase transition and lipid separation during freezing [29,122].…”