Determination of Five Macrolide Antibiotic Residues in Eggs Using Liquid Chromatography/Electrospray Ionization Tandem Mass Spectrometry

Abstract

A method using liquid chromatography electrospray ionization tandem mass spectrometry (LC/ESI-MS/MS) for the determination of trace levels of five macrolide antibiotics (spiramycin, tilmicosin, oleandomycin, erythromycin, and tylosin) in eggs is presented. Data acquisition under MS/MS was achieved by applying multiple reaction monitoring (MRM) of two or three fragment ion transitions to provide a high degree of sensitivity and specificity for both quantification and confirmation. Matrix-matched standard calibration curves were used to achieve the best accuracy of the method. A fully nested experimental design was used to study the measurement uncertainty arising from intermediate precision and trueness or proportional bias. The overall recoveries, that is, those determined by the nested experiments, of spiramycin, tilmicosin, oleandomycin, erythromycin, and tylosin at fortified levels of 60, 100, 200, and 300 microg/kg were 96.8, 98.2, 98.3, 98.8, and 95.4%, respectively. The LC/ESI-MS/MS method detection limits (S/N > or = 3:1) of five macrolides were <1.0 microg/kg.

The challenges of developing a generic extraction procedure to analyze multi‐class veterinary drug residues in milk and honey using ultra‐high pressure liquid chromatography quadrupole time‐of‐flight mass spectrometry

“…Based on our previous experience, the quantitative result of erythromycin A by SPE under a slight basic condition such as 0.1 M phosphate buffer (pH 8.0) was very reproducible with intermediate precision 3.4% in milk and 5.2% in eggs according to the same nested experimental design. [16,28] However, the intermediate precision was 39.4% in honey and 34.6% in milk in the current study. Apparently the extraction procedure, especially the acidic pH condition which could cause erythromycin A to degrade, contributed to the large variations.…”

“…[16,17] The main factors of variances associated with the method performance or measurement uncertainties of an in-house validated method using the spiked samples were concentrations or spike levels of analytes, matrix effects, day-to-day variation and within-day variation of the method. The last two factors were designated as the intermediate precision.…”

Aspectos analíticos e regulatórios na determinação de resíduos de macrolídeos em alimentos de origem animal por cromatografia líquida associada à espectrometria de massas

“…Os macrolídeos são bem retidos em cartuchos HLB e permitem a lavagem com até 40% de metanol sem perdas significativas. 18 Os cartuchos Strata-X ® são compostos de um polímero de estireno divinilbenzeno com superfície modificada e apresentam funcionalidade similar ao HLB na retenção de macrolídeos.…”

“…A desproteinização é usualmente realizada com solventes orgânicos, como acetonitrila, em quantidades 3 a 5 vezes superiores à quantidade de amostra. 18,19,[25][26][27][28][29][30] Os extratos são posteriormente desengordurados com hexano e submetidos à extração em fase sólida, onde ocorre a remoção de interferentes e a concentração dos analitos.…”

“…Dentre as possíveis aplicações da espectrometria de massas em análise de macrolídeos estão: o estudo farmacocinético ou da cinética de depleção destes fármacos e o monitoramento de sua eficácia; 37,51-55 a elucidação estrutural dos macrolídeos, das impurezas e produtos de degradação; 11,12,19,56 a garantia da segurança dos consumidores através do monitoramento de seus resíduos em alimentos, contribuindo para o comércio internacional de alimentos; [18][19][20][26][27][28]57,58 a detecção de tilosina e espiramicina em ração animal, já que o uso destes fármacos como promotores de crescimento foi banido na União Europeia, 31,59,60 e a investigação da ocorrência de macrolídeos em amostras ambientais. [61][62][63][64] A espectrometria de massas vem sendo largamente utilizada nas áreas biológica e alimentícia devido a algumas características da técnica, tais como: alta detectabilidade -concentrações baixas de substâncias podem ser detectadas e analisadas; baixo volume de amostra -o uso de interfaces apropriadas para pequenos volumes permite que se use quantidade muito pequena de amostras e, possibilidade de associação com técnicas de separação -a utilização de misturas água/solvente na ionização faz com que ela seja ideal para o acoplamento de sistemas de separação como HPLC.…”