Developing method for allelic somatic mutations burden of Janus kinase 2 (V617F JAK2) detection in pools of venous blood samples

Gorbenko, A. S.; Stolyar, M. A.; Субботина, Т. Н.; Mihalev, M.; Olkhovskiy, I. A.

doi:10.17116/labs20165119-25

Cited by 3 publications

(1 citation statement)

References 15 publications

Supporting

Mentioning

Contrasting

Unclassified

Order By: Relevance

“…С целью выявления мутации V617F JAK2 использовали разработанный нами набор реактивов для метода аллель-специфической полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (ПЦР-РВ) [5]. Мутации в гене кальретикулина CALR определяли в соответствии с описанным нами ранее методом [6], мутации в гене рецептора тромбопоэтина -по методике [7].…”

Section: материал и методыunclassified

On the issue of validation of the method for somatic mutations determining in Janus kinase-2 (JAK2V617F), calreticulin (CALR) and receptor of thrombopoietin (MPL) genes in the dry blood drops

Gorbenko¹,

Stolyar²,

Olkhovskiy³

2017

Lab. sluzh.

Self Cite

View full text Add to dashboard Cite

Молекулярно-генетические исследования для определения соматических мутаций в генах янускиназы-2 (JAK2), кальретикулина (CALR) и рецептора тромбопоэтина (MPL) включены в клинические рекомендации ВОЗ в качестве основных диагностических критериев хронических миелопролиферативных неоплазий (ХМН). Однако высокая стоимость проведения редких молекулярно-генетических тестов в клинико-диагностических лабораториях, обслуживающих малонаселенные регионы, ограничивает доступность тестирования и своевременность диагностики онкогематологических заболеваний. Одним из альтернативных вариантов взятия и транспортировки образцов цельной крови для генетических исследований является использование собранных и высушенных на специальном бумажном носителе капель крови (сухие капли крови-СКК). Цель работы-сопоставление результатов выявления диагностически важных мутаций в генах JAK2, CALR и MPL при использовании стандартного тестирования проб венозной крови и образцов из СКК. Материал и методы. Исследование проводили на 105 образцах крови пациентов с верифицированным диагнозом ХМН и известным мутационным статусом, а также на 36 образцах здоровых добровольцев. СКК готовили нанесением на фильтровальный бланк с последующим просушиванием в течение 2 ч. ДНК выделяли сорбентным методом с использованием набора ДНК-Сорб-B (ООО «ИЛС», Россия). Мутации V617F в гене JAK2, c.1092_1143del и c.1154_1155insTTGTC в гене CALR выявляли с помощью наборов с использованием аллель-специфической полимеразной цепной реакции в режиме реального времени. Мутации W515L и W515K в гене MPL определяли в соответствии с методом, разработанным A. Pancrazzi и соавт. (2008). Результаты. Результаты тестирования жидких и сухих образцов крови полностью совпадали между собой по выявляемости исследуемых мутаций. В количественном тесте также показана высокая степень корреляции (r=0,96, р<0,05) уровня аллельной нагрузки V617F JAK2 между результатами тестирования жидкой крови и СКК. Выводы. Полное совпадение результатов тестирования цельной крови и образцов СКК на основные диагностически важные мутации в генах JAK2, CALR и MPL и высокая корреляционная зависимость количественных результатов тестирования аллельной нагрузки JAK2V617F позволяют предложить использование технологии тестирования образцов СКК как для первичной диагностики, так и для мониторинга эффективности терапии хронических миелопролиферативных неоплазий. Ключевые слова: хронические миелопролиферативные неоплазии, сухие капли крови, аллель-специфическая полимеразная цепная реакция в режиме реального времени, соматические мутации JAK2V617F, CALR, MPL. On the issue of validation of the method for somatic mutations determining in Janus kinase-2 (JAK2V617F), calreticulin (CALR) and receptor of thrombopoietin (MPL) genes in the dry blood drops

show abstract

Section: материал и методыunclassified

On the issue of validation of the method for somatic mutations determining in Janus kinase-2 (JAK2V617F), calreticulin (CALR) and receptor of thrombopoietin (MPL) genes in the dry blood drops

Gorbenko¹,

Stolyar²,

Olkhovskiy³

2017

Lab. sluzh.

Self Cite

View full text Add to dashboard Cite

show abstract

JAK2V617F-positive clonal hematopoiesis of indeterminate potential in pregnant women

Olkhovskiy

Garber

Gorbenko³

et al. 2019

Akušerstvo, ginekologiâ i reprodukciâ

View full text Add to dashboard Cite

Aim: to assess the prevalence of V617F somatic mutation of the JAK2 gene in pregnant women.Materials and methods. This non-interventional study was performed in the framework of routine clinical practice and included 1532 samples of venous blood from pregnant women who applied for medical assistance at Krasnoyarsk Regional Clinical Center for Maternal and Child Welfare. We used blood samples left after all routine laboratory tests had been done. These leftovers were pooled in the way that ensured an equal ratio of nucleated cells. Each pool contained 7 separate blood samples. The unused samples that remained after the pooling were frozen and stored at –20°C until the end of entire testing procedure. The V617F JAK2 mutation was detected by the real-time allele-specific polymerase chain reaction test.Results. Among the examined pregnant women, 6 (0.4 %) were identified as carriers of V617F JAK2 mutation. Three women with this mutation suffered from infertility for 4, 5, and 10 years; two of them had repeated miscarriages in the first trimester of pregnancy. The 6 women – carriers of this mutations had no concomitant genetic polymorphisms typical of thrombophilia (factors FII, FV), and no abnormal coagulation characteristics. Analysis of their medical records showed that in the past, two of these women had gestational hypertension, one developed a clinical picture of preeclampsia, and another one (with the maximum presence of the mutant allele) had a history of acute lymphoblastic leukemia followed by stable remission.Conclusion. The routine laboratory detection of the V617F JAK2 mutation can facilitate timely identification of the increased risk of pregnancy pathology, as well as timely diagnosis of hematological cancer.

show abstract

Somatic mutation of the V617F JAK2 gene in patients of the cardiovascular diseases

Olkhovskiy

Gorbenko²,

Stolyar

et al. 2019

Terapevticheskii arkhiv

View full text Add to dashboard Cite

The JAK2 V617F somatic mutation is one of the most frequent markers of CHIP (clonal hematopoiesis of indeterminate potential). CHIP is characterized by the presence of a myeloid cells clone in peripheral blood in the absence of the sufficient reasons to diagnose the hematologic disease. The CHIP is proposed as a potential independent risk factor for vascular pathology. The aim of this study is to identify carriers of JAK2 V617F mutation among patients admitted for planned hospitalization at the Federal Center of Cardiovascular Surgery of Krasnoyarsk. Materials and methods. The study included 930 venous blood samples. JAK2 V617F mutation was detected by using the allele - specific real time polymerase chain reaction. Results. JAK2 V617F mutation was detected in 15 (1.6%) patients, but only two of them had blood cell count that could cause a hematological disease to be suspected. Conclusion. The inclusion of the JAK2 V617F mutation detection in the complex of laboratory tests of the cardiovascular patients can facilitate the timely identification of patients with increased thrombotic risk, as well as the timely diagnosis of myeloproliferative diseases.

show abstract

Developing method for allelic somatic mutations burden of Janus kinase 2 (V617F JAK2) detection in pools of venous blood samples

Cited by 3 publications

References 15 publications

On the issue of validation of the method for somatic mutations determining in Janus kinase-2 (JAK2V617F), calreticulin (CALR) and receptor of thrombopoietin (MPL) genes in the dry blood drops

On the issue of validation of the method for somatic mutations determining in Janus kinase-2 (JAK2V617F), calreticulin (CALR) and receptor of thrombopoietin (MPL) genes in the dry blood drops

JAK2V617F-positive clonal hematopoiesis of indeterminate potential in pregnant women

Somatic mutation of the V617F JAK2 gene in patients of the cardiovascular diseases

Contact Info

Product

Resources

About