Development of ELISAs for the measurement of IgM and IgG subclasses in sera from llamas (Lama glama) and assessment of the humoral immune response against different antigens

Simone, Emilio A. De; Saccodossi, Natalia; Ferrari, Alejandro; Leoni, Juliana

doi:10.1016/j.vetimm.2008.06.015

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“…Se utilizó la técnica de RT PCR tiempo real, debido a que no existen técnicas serológicas para determinar la presencia de IgA secretora en el epitelio intestinal en camélidos sudamericanos. En Argentina, se ha desarrollado una prueba ELISA para la detección de IgG e IgM para evaluar la respuesta humoral frente a patógenos sistémicos mediante la producción de antisuero específico en conejos empleando proteínas recombinantes (De Simone et al, 2008).…”

Section: Discussionunclassified

CINÉTICA DE EXPRESIÓN DE INMUNOGLOBULINA A EN EL EPITELIO INTESTINAL DE CRÍAS DE ALPACA (Vicugna pacos).

Dionisio

Manchego

Chiok

et al. 2014

Rev. investig. vet. Perú

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A mis padres Janet y Adolfo, a mis hermanas Jenny y Angie, a mi pareja Liseth, gracias por todo su apoyo y paciencia dada durante esta etapa de mi carrera.A mis amigos Carla Bardález, Helen Salazar, Luis Ramos, Henry Vega, Carlos Torres, Noe Oviedo etc. Por que en algún momento me cruce con ustedes y me brindaron buenos consejos, ánimos y ayuda cuando creía que la sustentación estaba lejos, gracias por su apoyo. La crianza tiene importancia económica no sólo por la producción de fibra, sino porque también constituye una fuente de trabajo para el poblador altoandino (Bustinza, 2001). Los problemas de salud animal constituyen uno de los principales factores de pérdidas económicas que afectan a las comunidades alpaqueras y que limitan el incremento de la producción y productividad porque reducen la calidad y cantidad de fibra y carne; y elevan los costos de producción. Uno de los factores de mayor impacto económico es la morbilidad y mortalidad de crías de alpaca ocasionado principalmente por enterotoxenia, neumonías y colibacilosis (Ramírez, 2009).En general, frente a la invasión de un agente infeccioso por vía digestiva se activa una respuesta inmunitaria a nivel de las mucosas donde la inmunoglobulina A (Ig A) en la mucosa intestinal constituye el principal anticuerpo que limitará la invasión de muchos agentes patógenos (Braathen et al., 2007). La IgA es el isotipo de anticuerpo más predominante en secreciones intestinales (Bernard, 2005). Su producción local constituye entre 70% -90% de todas las inmunoglobulinas presentes en las secreciones intestinales (Austin et al., 2003), y donde son inducidos, transportados y regulados por mecanismos distintos a los de una respuesta sistémica (Zaldivar, 2002). Debido a su presencia cerca de las membranas externas, la IgA en la mucosa intestinal constituye una primera línea de defensa frente a microorganismos del ambiente exterior. Se ha postulado que la IgA inhibe la adhesión de microorganismos a la 10 superficie de las células mucosas, previniendo así, su entrada a los tejidos. Una propiedad de laIgA secretoria es su multivalencia, que se asocia a una gran avidez por la unión a los antígenos; esto puede resultar relevante en la neutralización de virus (Corthésy y Spertini, 1999;Zaldivar, 2002;Bernard, 2005). En los camélidos sudamericanos, existen escasos estudios que miden la expresión de la IgA en mucosas, tal vez debido a que no existe un método cuantitativo de IgA; debido a esto, el objetivo del trabajo fue determinar la expresión del ARNm de IgA en la mucosa intestinal de crías de alpacas y evaluar su expresión relativa durante los primeros 45 días de edad. Estos hallazgos nos permitirán brindar un aporte al conocimiento de respuesta inmune en esta especie, y posteriormente, dilucidar en que momento de la vida del neonato, éste empieza a producir IgA propio para defenderse de agentes patógenos. 11 II. REVISIÓN BIBLIOGRÁFICA La mucosa intestinalEl intestino delgado tiene como principal función la absorción de nutrientes. Está ubicado entre el estómago y el intestino ...

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Section: Discussionunclassified

CINÉTICA DE EXPRESIÓN DE INMUNOGLOBULINA A EN EL EPITELIO INTESTINAL DE CRÍAS DE ALPACA (Vicugna pacos).

Dionisio

Manchego

Chiok

et al. 2014

Rev. investig. vet. Perú

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“…Sueros policlonales de anti-IgM, anti-IgG total y anti-IgG1 (dominio CH1) fueron obtenidos mediante la inmunización de conejos como fue previamente descripto (De Simone et al, 2008). También se utilizó un anti-IgG de llama (H+L) policlonal de cabra conjugado con una peroxidasa (HRP; Bethyl Laboratories Inc., Montgomery, Tex.…”

Section: Anticuerposunclassified

“…Luego de cinco lavados, los pocillos fueron incubados con un anti-IgM de llama conjugado con HRP realizado en conejo en una dilución de 1:200. Este anticuerpo secundario fue marcado como se describió previamente, (De Simone et al, 2008). Luego de incubar y lavar, las reacciones se realizaron como se describió previamente.…”

Section: Elisas Sandwichunclassified

“…La concentración sérica de IgG al nacimiento no fue precisamente determinada, aunque algunos trabajos llevados a cabo en camélidos europeos encontraron niveles de IgG de 0,26±0,23 mg/ml, (Wernery, 2001). Esta concentración es marcadamente más baja que en una llama adulta (8,93±1,815 mg/dl), (De Simone et al, 2008). A las 48 horas de ingerido el calostro la concentración de IgG es de 23,29 mg/ml (Bravo et al, 1997).…”

Section: Introductionunclassified

“…En un trabajo previo hemos desarrollado un anti-suero contra isotipos de llama que nos permitió medir IgM y las distintas las subclases de IgG mediante ELISA (De Simone et al, 2008;Saccodossi et al, 2006). En este trabajo, realizamos modificaciones en el ELISA anteriormente citado para la cuantificación de IgG total, IgM e IgG1 en calostro.…”

Section: Introductionunclassified

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Caracterización de IgM, IgG Total, IgG1 y anticuerpos de cadena pesada en calostro de llamas ("Lama glama") mediante Elisa

Caggiano¹,

Saccodossi

Gentile

et al. 2014

Revista Complutense De Ciencias Veterinarias

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RESUMENObjetivos: determinar los niveles de IgM, IgG total y Anticuerpos de Cadena Pesada (HCAbs; por su sigla en inglés Heavy Chain Antibodies) (IgG2 e IgG3) en calostro de llamas y evaluar la concentración de HCAbs en relación a la IgG total y al isotipo convencional IgG1.Métodos: en este estudio se utilizaron 15 llamas preñadas, que fueron ordeñadas dentro de las primeras 24 horas post-parto. Se diseñaron ELISAs Sandwich para la cuantificación de IgM total, IgG total e IgG1. La concentración de HCAbs fue calculada mediante la diferencia entre IgG total e IgG1. (HCAbs =IgG total-IgG1).Resultados: los niveles encontrados fueron: IgM=17.02 mg/ml (DS=9.85) IgG total= 42.54 mg/ml (DS=27.79), IgG1=24.34 mg/ml (DS=13.96) y HCAbs (IgG total-IgG1)= 18.19 mg/ml (DS=15.49). Los resultados de IgG fueron consistentes en relación a lo descripto en otras especies con similar tipo de placentación. Los HCAbs representan el 43% de IgG calostral y la concentración de IgM presentó valores muy altos (dos y tres veces más elevados) que los descriptos en las especies con similar tipo de placentación.

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Structure and specificity of several triclocarban‐binding single domain camelid antibody fragments

Rosa¹,

Wogulis

et al. 2018

J of Molecular Recognition

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The variable VHH domains of camelid single chain antibodies have been useful in numerous biotechnology applications due to their simplicity, biophysical properties, and abilities to bind to their cognate antigens with high affinities and specificity. Their interactions with proteins have been well-studied, but considerably less work has been done to characterize their ability to bind haptens. A high-resolution structural study of three nanobodies (T4, T9, and T10) which have been shown to bind triclocarban (TCC, 3-(4-chlorophenyl)-1-(3,4-dichlorophenyl)urea) with near-nanomolar affinity shows that binding occurs in a tunnel largely formed by CDR1 rather than a surface or lateral binding mode seen in other nanobody-hapten interactions. Additional significant interactions are formed with a non-hypervariable loop, sometimes dubbed "CDR4". A comparison of apo and holo forms of T9 and T10 shows that the binding site undergoes little conformational change upon binding of TCC. Structures of three nanobody-TCC complexes demonstrated there was not a standard binding mode. T4 and T9 have a high degree of sequence identity and bind the hapten in a nearly identical manner, while the more divergent T10 binds TCC in a slightly displaced orientation with the urea moiety rotated approximately 180° along the long axis of the molecule. In addition to methotrexate, this is the second report of haptens binding in a tunnel formed by CDR1, suggesting that compounds with similar hydrophobicity and shape could be recognized by nanobodies in analogous fashion. Structure-guided mutations failed to improve binding affinity for T4 and T9 underscoring the high degree of natural optimization.

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Development of ELISAs for the measurement of IgM and IgG subclasses in sera from llamas (Lama glama) and assessment of the humoral immune response against different antigens

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CINÉTICA DE EXPRESIÓN DE INMUNOGLOBULINA A EN EL EPITELIO INTESTINAL DE CRÍAS DE ALPACA (Vicugna pacos).

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Caracterización de IgM, IgG Total, IgG1 y anticuerpos de cadena pesada en calostro de llamas ("Lama glama") mediante Elisa

Structure and specificity of several triclocarban‐binding single domain camelid antibody fragments

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