Diagnostische Aussagekraft der BRAF-Mutation V595E in Urinproben, Ausstrichen und Bioptaten beim kaninen Übergangszellkarzinom

Abstract

Zusammenfassung Gegenstand und Ziel: Übergangszellkarzinome (ÜZCa) sind die häufigsten malignen Tumoren der harnableitenden Wege beim Hund. In früheren Studien wurde mittels DNA-Sequenzierung in Urinproben, Gefrier- und Paraffinmaterial von Harnblasenbioptaten die Mutation im BRAF-Gen V595E bei bis zu 85 % der kaninen ÜZCa in den Tumorzellen identifiziert. Ziel der eigenen Arbeit war, diese Methode für zytologische Ausstriche zu etablieren und die Prävalenz dieser Mutation im eigenen Kollektiv zu untersuchen. Material und Methoden: Es wurden 43 formalinfixierte Bioptate, 48 Urinproben und/oder 31 zytologische Ausstriche von 66 Hunden mit ÜZCa (n = 33), Harnblasenpolypen (n = 7), Zystitis (n = 23) oder ohne Harnblasenerkrankung (n = 3) analysiert. Die DNA-Isolierung erfolgte mit kommerziell erhältlichen Testkits. Das Exon 15 wurde mittels Sanger-Sequenzierung auf das Vorliegen der BRAF-Mutation c.1784T>A untersucht. Ergebnisse: Aus 39/43 Paraffinproben, 38/48 Urinproben und 16/18 zellreichen Ausstrichen ließ sich eine ausreichende Menge auswertbarer DNA isolieren. Bei 10/13 zellarmen Ausstrichen reichte die DNA für eine aussagefähige PCR nicht aus. In allen Fällen, in denen verschiedene Materialien vorlagen, stimmten die Ergebnisse der BRAF-Genanalyse in den Paraffin-, Urin- und/oder Zytologieproben des jeweiligen Hundes überein, sofern sich DNA isolieren ließ. Bei 22/31 Hunden (70,9 %) mit einem ÜZCa wurde die Mutation festgestellt, während sie bei keinem Hund mit Zystitis, Polypen oder ohne Harnblasenveränderung gefunden wurde. Schlussfolgerung und klinische Relevanz: Die Untersuchung auf Vorliegen einer BRAF-Variante stellt ein gutes neues Verfahren dar, mit dem sich in Zweifelsfällen die Verdachtsdiagnose eines ÜZCa häufig absichern lässt. Für die Methode eignen sich alle nichtinvasiv gewonnenen, zellreichen Materialien wie Ausstriche von Urinsediment oder Ansaugbioptate sowie formalinfixierte Bioptate. Aber nur der positive Befund ist beweisend. Hinsichtlich der prognostischen und therapeutischen Relevanz sowie der Möglichkeiten einer Frühdiagnostik von ÜZCa mittels der BRAF-Mutationsanalyse bedarf es weiterer Untersuchungen.

Effective detection of BRAFV595E mutation in canine urothelial and prostate carcinomas using immunohistochemistry

“…It is therefore key, as for any molecular test, that the BRAF mutation status is interpreted together with histopathology and clinical information. Thus far, canine BRAF V595E is considered cancer‐specific and has not yet been detected in benign tissue 29,50 . This is also consistent with our results from the prostate, where all non‐neoplastic prostate samples were negative for BRAF V595E on IHC.…”

“…Both PCR techniques are highly specific, however, dPCR outperforms qPCR due to its higher sensitivity 28 . PCR can be performed using liquid or tissue biopsies, including urine, cytologic smears or formalin‐fixed paraffin‐embedded (FFPE) material 29 . However, as with any diagnostic tool, there are certain limitations.…”

Die Urinuntersuchung bei Hund und Katze, Teil 2: Urinsedimentanalyse

“…Daher sind neben bildgebenden Verfahren oft weiterführende Untersuchungen, wie z. B. die Mikroskopie eines gefärbten Trocken-präparats mit zytologischer Untersuchung auf Malignitätsanzeichen oder die histologische Untersuchung endoskopisch gewonnener Biopsieproben erforderlich [3,4,[54][55][56][57].Bei kaninen Übergangszellkarzinomen und bei Prostatakarzinomen kann der Nachweis der BRAF-Mutation in gewonnenem Zellmaterial des Urinsediments oder von Kathetersaugbiopsien hilfreich sein [54][55][56][57]. Die Spezifität des Tests liegt bei beiden Tumorarten bei 100 %, sodass ein positives Ergebnis beweisend für das Vorliegen eines Karzinoms ist [57].…”

“…Die Spezifität des Tests liegt bei beiden Tumorarten bei 100 %, sodass ein positives Ergebnis beweisend für das Vorliegen eines Karzinoms ist [57]. Die Sensitivität liegt für die Detektion von Prostatakarzinomen zwischen 61 % und 80 % [56,57] und für Übergangszellkarzinome bei circa 70 % [54,56], sodass bei einem negativen Ergebnis trotzdem ein Karzinom vorliegen kann.…”