Diseño De Plásmidos Para La Expresión Del Cynd en Arabidopsis Thaliana Vía Agrobacterium Tumefaciens

Abstract

El cianuro, usado por las industrias mineras, es un compuesto tóxico que afecta principalmente a la metaloenzima c oxidasa en los seres vivos, enzima esencial para la respiración celular; por lo que la inhibición de esta enzima bloquea la fosforilación oxidativa, provocando la muerte celular. Ante ello, métodos biológicos como la fi torremediación proporcionan una alternativa para reducir o degradar contaminantes como el cianuro; sin embargo, esta técnica requeriría plantas que toleren altas concentraciones del metal en el suelo. Por otro lado, algunos microorganismos tienen una alta capacidad de desintoxicación de cianuro debido a una serie de vías metabólicas, como es el caso del Bacillus pumilus Meyer and Gottheil 1901, que presenta la cianidasa CynD que permite la degradación del cianuro a ácido fórmico y amonio. Por ello, el presente trabajo tiene como objetivo el diseño de plásmidos para la expresión de CynD en una planta modelo como la Arabidopsis thaliana (L.), Heynh. vía Agrobacterium tumefaciens (Smith & Townsend, 1907) Conn, 1942 con el fin de sentar las bases para evaluar si el CynD de B. pumilus le podría conferir a las plantas la facultad de crecer en presencia de cianuro y ayudar a su degradación. Para lo cual, se hizo uso de herramientas de la bioinformática, logrando diseñar un vector de clonación (pUCCynD), insertando in silico la secuencia del CynD en el polilinker del plásmido pUC18, entre las enzimas EcoRi (5’GAATTC - 3’CTTAAG) y BamHi (5’GGATCC-3’CCTAGG) del sitio múltiple de restricción y también un vector de transformación (pBCynD), insertando in silico la secuencia del CynD en el polilinker del plásmido pBI121, entre las enzimas ScaI (5’GAGCTC - 3’CTCGAG) y BamHI (5’GGATCC - 3’CCTAGG).