Effect of IDA and TREN chelating agents and buffer systems on the purification of human IgG with immobilized nickel affinity membranes

Cromatografia de afinidade por íons metálicos imobilizados (IMAC) de biomoléculas: aspectos fundamentais e aplicações tecnológicas

“…31,[35][36][37][38][39] No caso de membranas e géis empregados em leito expandido, as técnicas de ativação e imobilização dos agentes quelantes são similares àquelas utilizadas para os géis cromatográficos tradicionais.…”

“…Esta propriedade pode também ser empregada na etapa de eluição, onde o aumento de concentração de Tris ou fosfato pode favorecer a dessorção das proteínas. 31,35,38,48,49 Dependendo da situação, a fase móvel pode requerer a adição de outros componentes em sua constituição, que apresentem a função de manter a integridade de proteínas (inibidores de protease ou glicerol, por exemplo), de prevenir a agregação de proteínas (mercaptoetanol, por exemplo) ou meramente melhorar a resolução do processo. 24,50 Vários autores mostraram que a presença de detergentes não-iônicos (como NP-40 e Tween 80), uréia, cloreto de guanidina 6 mol L -1 e solventes orgânicos em baixa concentração não interfere nos processos de purificação por IMAC.…”

“…37,49,[57][58][59][60][61][62][63] A literatura mostra que, além destas aplicações, IMAC foi utilizada para separação de diferentes tipos de células microbianas, uma vez que estas, quando possuíam resíduos de histidina acessíveis, apresentavam a capacidade de serem adsorvidas em uma coluna monolítica de estrutura macroporosa composta por criogéis de poliacrilamida com IDA-Cu 2+ imobilizado. 65 Proteínas que contêm naturalmente resíduos de histidinas acessíveis (recombinantes ou não) e apresentam importância comercial no campo terapêutico e diagnóstico, como proteínas do soro humano, 29 imunoglobulinas, 31,35,38,[66][67][68][69][70][71] interferon, 72 proteína C humana, 73,74 fator IX 73,75 e hormônio de crescimento humano, 76 foram purificadas por IMAC utilizando os metais de transição Cu 2+ , Ni 2+ , Zn 2+ , Fe 3+ e Co 2+ imobilizados. Outros íons metálicos, diferentes dos metais de transição, tais como Al 3+ (metal representativo), Ca 2+ (metal alcalino terroso) e Yb 3+ (lantanídio), foram empregados para purificação de transferrina, albumina, α 2 -macroglobulina e γ-globulinas, alcançando-se elevadas seletividades, mostrando-se uma alternativa atrativa para fracionamento seletivo de proteínas do soro humano.…”

“…Os resultados promissores, obtidos por diversos grupos de pesquisa, fazem de IMAC uma boa alternativa aos métodos já existentes para a purificação de IgG podendo atingir, em muitos casos, teor de pureza superior a 90%. 38,66,67,71 Outras proteínas sem modificação prévia, apresentando naturalmente afinidade por íons metálicos foram purificadas com êxito por IMAC, podendo-se citar a quimotripsina, 48 a catalase, 78 o glucagon 79 e a lisozima. 80 Caso a proteína alvo não apresente naturalmente resíduos de histidina acessíveis, a purificação pode ser executada por IMAC negativa.…”

Purification of IgG from Sera of Rabbit and Guinea Pig by Flow-Through Mode Ion-Exchange Chromatography using DEAE Sepharose Fast Flow Column

“…Purified immunoglobulin G (IgG) from the sera of various animal species has wide applications in medical and biological research [1], clinical diagnosis [2] and industries [3]. Routinely, serum IgG is purified by a procedure consisting of saturated ammonium sulfate precipitation (SASP) and a subsequent chromatography such as affinity chromatography [4] or ion-exchange chromatography (IEC) [5].…”