Effects of glucose and protein sources on bovine embryo development in vitro

Gómez, E.; Díez, C.

doi:10.1016/s0378-4320(99)00078-0

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“…As an unde®ned compound, serum may give unrepeatable results. Although this problem can be overcome by using simple media under de®ned conditions, protein supplementation has been shown to be bene®cial for embryo development in vitro [15]. Therefore, we have chosen a medium with albumin instead of with synthetic polymers to test the effects of acetoacetate in serum free culture conditions.…”

Section: Introductionmentioning

confidence: 99%

Effects of acetoacetate and d-β-hydroxybutyrate on bovine in vitro embryo development in serum-free medium

Gómez¹,

Duque²,

Dı́az³

et al. 2002

Theriogenology

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It is known that the ketone bodies acetoacetate and D-b-hydroxybutyrate can be metabolized by the early bovine embryo for in vitro development. In the present work, we report experiments leading to the culture of bovine embryos in the absence of serum. In vitro-produced bovine zygotes were cultured in modi®ed synthetic oviduct¯uid medium supplemented with acetoacetate derivatives, acetoacetate and D-b-hydroxybutyrate. Acetoacetate and its derivatives prevented blastocysts from forming in the absence of serum during the whole culture period. However, from Days 6 to 8 of culture in the absence of serum, acetoacetate did not affect development as compared to controls containing lactate and pyruvate or no substrate. Interestingly, D-b-hydroxybutyrate stimulated blastocyst and expansion development, and allowed lipid mobilization. In feeder cells coculture, embryos produced with D-b-hydroxybutyrate showed improved hatching. Embryos cultured in D-bhydroxybutyrate were viable upon transfer to recipients, although no pregnancies were con®rmed later by ultrasonic scanning. The protective effect of serum upon embryos cultured in medium containing acetoacetate is apparently not required in the presence of D-b-hydroxybutyrate. #

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Section: Introductionmentioning

confidence: 99%

Effects of acetoacetate and d-β-hydroxybutyrate on bovine in vitro embryo development in serum-free medium

Gómez¹,

Duque²,

Dı́az³

et al. 2002

Theriogenology

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“…Entretanto, Folhadella et al (2004), utilizando um sistema de cultivo semelhante, obtiveram taxas de eclosão maiores e não evidenciaram diferenças entre as taxas de eclosão dos embriões cultivados a fresco e daqueles submetidos a vitrificação. Esta diferença também pode ter sido causada pela composição do soro, que é altamente variável dependendo da fonte (animal e/ou fornecedor) e do número de lote (Gomez & Diez, 2000). Alguns lotes podem ser inertes, tóxicos ou possuir algum tipo de patógeno (Palma, 2001).…”

Section: Resultsunclassified

Efeito do transporte no desenvolvimento de embriões bovinos cultivados in vitro a fresco ou reaquecidos após vitrificação

et al. 2006

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RESUMO -Avaliou-se a viabilidade de embriões bovinos cultivados in vitro, a fresco ou reaquecidos após vitrificação, depois de transportados por 6 ou 12 horas. Oócitos obtidos de folículos de ovários coletados em matadouro foram maturados, fecundados e cultivados in vitro. Após sete dias de cultivo, blastocistos com grau de qualidade I e II (segundo o manual da IETS-1998) foram selecionados, envasados em OPS ( open pulled straws) e vitrificados em nitrogênio líquido. O reaquecimento foi realizado a 39 o C pela passagem em soluções de HM com concentrações decrescentes de sacarose (0,25M -0,15M) por cinco minutos em cada solução. Foram avaliados três tratamentos -V0: embriões vitrificados, reaquecidos e cultivados in vitro (n=25); V6: embriões vitrificados, transportados por 6 horas (simulação em palhetas), reaquecidos e cultivados in vitro (n=29); e V12: embriões vitrificados, transportados por 12 horas, reaquecidos e cultivados in vitrocomparados, cada um, a um tratamento controle, com embriões a fresco -C0: embriões a fresco cultivados in vitro (n=26); C6: embriões a fresco cultivados in vitro após 6 horas de transporte (n=30); e C12: embriões a fresco cultivados in vitro após 12 horas de transporte (n=30). Os embriões foram co-cultivados com células da granulosa em microgotas de TCM 199 acrescido de SFB. Foram avaliadas as taxas de re-expansão e eclosão após 48 horas de cultivo. A análise foi realizada pelo teste do qui-quadrado. As taxas de re-expansão entre os grupos V0, V6 e V12 não diferiram, assim como as taxas de eclosão entre os embriões vitrificados e os controles. As taxas de eclosão, no entanto, diferiram entre os embriões submetidos à vitrificação e os controles. Embriões bovinos produzidos in vitro podem ser transportados a fresco ou vitrificados por períodos de até 12 horas, pois possibilitam taxas de eclosão satisfatórias.Palavras-chave: criopreservação, DMSO, produção in vitro de embriões Effect of transportation on development of fresh or vitrified-warmed bovine embryosABSTRACT -The aim of this study was to evaluate the viability of in vitro produced bovine embryos, fresh or warmed, after submitted to different periods of transportation (6h-12h). Oocytes obtained from ovaries collected from slaughterhouse were matured, fertilized and cultured in vitro. After seven days, grades I and II blastocysts (according to IETS manual) were selected and vitrified after exposition to PBS solution with 5% fetal calf serum (HM), added with 10% ethylene glycol (EG) and 10% of dymetil sulfoxide (DMSO), for one minute, followed by HM solution with 20% EG and 20% DMSO, for 20 seconds. Embryos were loaded into open pulled straws (OPS) and plunged into liquid nitrogen. Warming was performed at 39 o C by embryo exposure to decreasing concentration of sucrose (0.25 and 0.15M), for five minutes in each step. The warmed embryos were distributed in three groups: V0: in vitro cultured after warmed; V6: embryos loaded into straws and kept for 6 hours at 35ºC, before in vitro culture; and V12: embryos loaded into straws an...

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“…Os meios indefinidos são aqueles cuja composição incluem alguma substância de origem biológica (GORDON, 1994). Os embriões bovinos podem ser cultivados em meios com condições definidas, mas a suplementação com proteína de origem animal tem se mostrado benéfica para o desenvolvimento dos embriões (GOMEZ e DIEZ, 2000;FIGUEIRÓ et al, 2000a).…”

Section: Introductionunclassified

“…Embriões cultivados na ausência de proteínas de origem animal possuem diferenças na sua atividade metabólica, diminuição na capacidade de desenvolvimento e no número de células quando comparados àqueles cultivados na presença destas proteínas (GOMEZ e DIEZ, 2000).…”

Section: Introductionunclassified

Produção in Vitro De Embriões Bovinos Em Meio Suplementado Com Fontes Protéicas Definidas E Indefinidas

Mozzaquatro¹,

Rubin²,

Silva³

et al. 2004

AVS

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RESUMO -Quinhentos e trinta e três (n=533) complexos cumulus-oócitos (CCO) bovinos foram utilizados para comparar a suplementação dos meios de maturação e cultivo com diferentes fontes protéicas: soro de égua em estro (SEE; n=150) e soro de vaca em estro (SVE; n=123), álcool polivinílico (PVA; n=128) e albumina sérica bovina (BSA; n=132). Os grupos de CCO foram distribuídos aletoriamente e maturados in vitro por 24h em TCM-199 com 10% de SEE, 10% SVE, 0,1% PVA e 0,6% BSA em estufa de cultivo com 5% de CO 2 , a 39ºC e umidade saturada. A fecundação foi realizada durante 18h, em meio FERT-TALP em estufa de cultivo. Os embriões foram cultivados por 8 dias em meio synthetic oviduct fluid (SOFaaci) com 5% SEE, 5% SVE, 0,1% PVA e 0,6% BSA em estufa de cultivo a 39ºC, sendo mantidos em bolsas gaseificadas com 5% CO 2 , 5% O 2 e 90% N 2 . A produção de embriões no D7 nos tratamentos SEE (33/142; 23%) e SVE (34/103; 33%) foi superior (P<0,05) a dos tratamentos PVA (6/116; 5%) e BSA (4/126; 3%). No D9, a taxa de blastocistos nos tratamentos SEE (22/142; 15%) e SVE (22/103; 21%) foram superiores (P<0,05) a do grupo BSA (3/126; 2%). A produção de blastocistos foi superior quando se adicionou soro ao meio de cultivo. Confirmou-se neste estudo que o SEE é uma alternativa para a PIV por três importantes razões: as taxas de produção embrionária obtidas, a facilidade de processamento e a redução da possibilidade de transmissão de doenças espécie-específicas.Palavras chaves: soro de égua, bovino, PIV, PVA, BSA.ABSTRACT -Five hundred and thirty three (n=533) bovine cumulus-oocytes complexes (COC) obtained by aspiration of 2-8mm diameter follicles were used to compare maturation and culture media containing distinct protein sources: estrus mare serum (EMS; n=150), estrus cow serum (ECS=123), polyvinyl alcohol (PVA; n= 128) and bovine serum albumin (BSA; n=132). COC groups were randomly distributed into treatments and in vitro maturated (IVM) in TCM-199 + 10% EMS, 10% ECS, 0.1% PVA and 0.6% BSA for 24h using an incubator with 5% CO 2 at 39ºC and saturated air humidity. Fertilization was accomplished during 18h in FERT-TALP medium at the same temperature and gas atmosphere of the previous maturation phase. Denudation was performed and the zygotes were cultured for 8 days in synthetic oviduct fluid (SOFaaci) medium + 5% EMS, 5% ECS, 0.1% PVA and 0.6% BSA in an incubator at 39ºC using gasified bags with 5% CO 2 , 5% O 2 and 90% N 2 . Embryo production in D7 for treatments EMS (33/142; 23%) and ECS (34/103; 33%) were higher (P<0,05) than PVA (6/116; 5%) and BSA (4/126; 3%). On day 9 blastocysts development rates in EMS (22/142; 15%) and ECS (22/103; 21%) treatments were higher (P<0.05) than in BSA (3/126; 2%). Blastocyst production was higher with the addition of serum to the medium. It was confirmed that EMS is an alternative for in vitro production (IVP) for three important reasons: the embryo production rates obtained, the easiness of the process and the reduction of the possibility of specific species disease transmission.

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Effects of glucose and protein sources on bovine embryo development in vitro

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Effects of acetoacetate and d-β-hydroxybutyrate on bovine in vitro embryo development in serum-free medium

Effects of acetoacetate and d-β-hydroxybutyrate on bovine in vitro embryo development in serum-free medium

Efeito do transporte no desenvolvimento de embriões bovinos cultivados in vitro a fresco ou reaquecidos após vitrificação

Produção in Vitro De Embriões Bovinos Em Meio Suplementado Com Fontes Protéicas Definidas E Indefinidas

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