Enhanced stabilization of mungbean thiol protease immobilized on glutaraldehyde-activated chitosan beads

Bhandari, S. D.; Gupta, Vijay; Singh, Hari

doi:10.1080/10242420802607918

Cited by 22 publications

(15 citation statements)

References 26 publications

Supporting

Mentioning

Contrasting

Unclassified

Order By: Relevance

“…38 As reported in our earlier publication, 32 the hydrolytic study of olive oil was done by a physically adsorbed lipase immobilized matrix, whereas in this study, it was done for the three oils (olive, palm, and castor oils) by an immobilized matrix covalently coupled and physically adsorbed As pH affects the stability, structure, and function of many globular proteins because of their ability to influence electrostatic interactions, the extent of hydrolysis is different at different pHs. One determines the optimum pH for the hydrolytic reaction by conducting the reaction at different pH values (5)(6)(7)(8)(9). Figure 7 shows the variation of hydrolytic activities with pH for olive oil.…”

Section: Resultsmentioning

confidence: 99%

See 1 more Smart Citation

Comparative study of the hydrolysis of different oils by lipase‐immobilized membranes

Gupta

Ingole

Singh

et al. 2011

J of Applied Polymer Sci

View full text Add to dashboard Cite

show abstract

Section: Resultsmentioning

confidence: 99%

“…[2][3][4] The target of immobilizing enzymes is to restrict their mobility over solid matrices without losing their activities. 5 Noinville et al 6 showed that lipases in immobilized condition are in open form, that is, without lids and capable of showing better activities.…”

Section: Introductionmentioning

confidence: 98%

Comparative study of the hydrolysis of different oils by lipase‐immobilized membranes

Gupta

Ingole

Singh

et al. 2011

J of Applied Polymer Sci

View full text Add to dashboard Cite

show abstract

“…At low glutaraldehyde concentration, all amine groups of support matrix remain unutilized; while high glutaraldehyde concentrations lead to multi point attachment of enzyme. Suitable glutaraldehyde concentration varies with protease being used 1% for mungbean thiol protease [32], 5% for acylase [41] while 2% for papain [42]. Hence, there is need to determine suitable glutaraldehyde concentration, where, higher hydrolytic activity is obtained with minimal enzyme load.…”

Section: Variation Of Glutaraldehyde Concentration For Activationmentioning

confidence: 99%

“…Glutaraldehyde is easily available at cheaper rates it reacts rapidly with amino groups to form thermally and chemically stable complexes [30]. Researchers have reported suitability of glutaraldehyde coupling for different types of proteases [30][31][32][33][34]. Random glutaraldehyde activation followed by protease coupling may lead to low or multiple binding which adversely affects protease activity.…”

Section: Introductionmentioning

confidence: 99%

Controlled Protein Hydrolysis with Immobilized Alkaline Endo-Protease

Odaneth¹

2017

JABB

View full text Add to dashboard Cite

“…Entre los métodos propuestos a fin de superar estas limitaciones se encuentran técnicas de screening de nuevas enzimas (Robertson & Steer, 2004), técnicas de biológica molecular e ingeniería de proteínas (Van der Burg & Eijsink, 2002), el diseño de reactores (Illanes & Wilson, 2003) y la inmovilización de las enzimas (Guisan, 1987;Adriano et al, 2005;Bhandari et al, 2009). (Brahim et al, 2002).…”

Section: Estudio De La Estabilidad Térmica De La Enzimaunclassified

Queratinasas microbianas: microorganismos, producción y caracterización

Cavello¹

View full text Add to dashboard Cite

Actualmente las proteasas alcalinas son ampliamente utilizadas en la industria del cuero, en distintas formulaciones de detergentes, también en el proceso de recuperación de plata, y en la producción de hidrolizados de proteínas. Comúnmente, todas estas proteasas se obtienen de fuentes microbianas que crecen en sustrato relativamente caros. Muchos estudios demuestran que cerca del 40% del costo de producción de estas enzimas está relacionada con la composición del medio de cultivo. Para reducir el costo de producción es importante la búsqueda de microorganismos capaces de crecer y de producir suficiente cantidad de la enzima usando sustratos baratos. En este sentido desechos de naturaleza queratínica tienen un enorme potencial para ser utilizacos como sustrato para la producción de un grupo de enzimas proteolíticas llamado queratinasas, las cuales presentan la capacidad de hidrolizar la queratina, proteína sumamente resistente a la degradación por su estructura y por la presencia en su molécula de puentes disulfuro. En el presente trabajo de tesis seis cepas de hongos no patógenos aislados de suelos alcalinos de la provincia de Buenos Aires, Argentina, (Acremonium murorum, Aspergillus sidowii, Cladosporium cladosporioides, Neurospora tetrasperma, Purpureocillium lilacinum (ex Paecilomyces lilacinus) y Westerdikella dispersa) fueron evaluados de acuerdo a su capacidad de producir enzimas queratinolíticas. Entre estas cepas, P. lilacinum resultó ser el hongo con mayor producción de actividad proteolítica y queratinolítica, tanto en fermentación en sustrato solido como en sumergido, siendo seleccionado para continuar con este trabajo. Se establecieron las condiciones óptimas de cultivo para la producción enzimática utilizando diseños experimentales y la metodología de superficie de respuesta. Las condiciones óptimas fueron: 7,10 g/l de glucosa; 0.0065 mg/l de CaCl<SUB>2</SUB> y pH inicial de 5.60; en estas condiciones de cultivo, el rendimiento máximo para la producción de queratinasas predijo por el modelo fue de 26,7 U azo/ml. La validación del modelo demostró que, tanto el polinomio como las correspondientes superficies de respuesta obtenidas describen adecuadamente la influencia de la concentración de glucosa, de calcio y el pH inicial en la producción de queratinasas. Luego de la optimización del medio de cultivo se procedió a la purificación de la enzima, las etapas involucradas en la purificación fueron la precipitación con sulfato de amonio y distintas técnicas cromatográficas de intercambio iónico y permeación en gel, con un factor de purificación de 19.8 veces y una actividad específica de 1430 U/mg de proteína. El peso molecular de la enzima, determinado por SDS-PAGE, fue de 37 kDa. La queratinasa extracelular de P. lilacinum se caracteriza por su apreciable estabilidad en un amplio intervalo de pH (4.0 a 9.0), y hasta 65°C. La inhibición que presenta frente a PMSF (98,2% de la inhibición) sugiere su naturaleza serínica. La enzima es activa y estable en presencia de solventes orgánicos tales como dimetilsulfóxido, metanol, e isopropanol; ciertos tensioactivos como Triton X-100, dodecilsulfato de sodio, y Tween 85, y agentes oxidante como el peróxido de hidrógeno. Sus parámetros cinéticos de inactivación térmica fueron estimados bajo diferentes condiciones y fue posible observar cómo afectan calcio, el glicerol y el propilenglicol a la estabilidad térmica de la enzima. Se investigó la inmovilización covalente de la queratinasa pura sobre un soporte de quitosán, optimizando la concentración de los agentes entrecruzantes glutaraldehído y genipina, así como también el tiempo de activación. La enzima inmovilizada presentó mayor estabilidad frente a pH y temperaturas extremas en comparación con la enzima libre, además retiene 61.37 % de la actividad enzimática inicial después de cinco ciclos de hidrolisis. Se estudiaron las potenciales aplicaciones biotecnológicas del extracto enzimático, entre ellas se estudió por su compatibilidad y estabilidad frente a detergentes comerciales (7 mg/ml) como Ariel y Skip, observándose que éste retiene más de 70 % de su actividad proteolítica inicial después de 1 h de incubación a 40ºC. La simulación de lavado reveló que el extracto era capaz de eliminar eficazmente las manchas de sangre. Se estudió también la posibilidad de utilizar este extracto enzimático en la recuperación de plata a partir de placas radiográficas usadas. En dosis de enzima de 6,9 U azoc/ml y a 60ºC, la eliminación completa de la capa de gelatina con la liberación completa de las partículas de plata se alcanzó en 6 min a pH 9.0. Por último, P. lilacinum además de producir enzimas queratinolíticas con la producción de paralela de amonio, mostró la capacidad producir sideróforos y ácido indolacético (IAA) al crecer con residuo pelo como sustrato en presencia de Trp y baja concentración de hierro. Se realizaron ensayos a nivel de invernadero con plantas de tomate, encontrándose que, en términos de peso seco, el hidrolizado mostró un efecto similar al del fertilizante de referencia. Además, el hidrolizado demostró poseer actividad antifúngica contra varios patógenos de las plantas. Estos resultados indican el potencial biotecnológico tanto del extracto enzimático como el de la enzima pura de P. lilacinum siendo interesante además la capacidad del hongo de producir esta enzima utilizando un como sustrato un residuo de valor nulo, con lo cual sería de esperar que su costo de producción resulte relativamente bajo.

show abstract

Enhanced stabilization of mungbean thiol protease immobilized on glutaraldehyde-activated chitosan beads

Cited by 22 publications

References 26 publications

Comparative study of the hydrolysis of different oils by lipase‐immobilized membranes

Comparative study of the hydrolysis of different oils by lipase‐immobilized membranes

Controlled Protein Hydrolysis with Immobilized Alkaline Endo-Protease

Queratinasas microbianas: microorganismos, producción y caracterización

Contact Info

Product

Resources

About